vò thÞ h»ng Bé Gi¸o dôc vµ ®µo t¹o Trêng ®¹i häc b¸ch khoa hµ néi ------------------------------------ LuËn v¨n th¹c sÜ khoa häc Ngµnh : c«ng nghÖ sinh häc c«ng nghÖ sinh häc Nghiªn cøu ®Æc tÝnh øng dông cña vi khuÈn lactic ®Ó s¶n xuÊt thøc ¨n ch¨n nu«i Vò thÞ h»ng 2004 - 2006 Hµ néi 2006 hµ néi 2006 17061131581661000000 LuËn v¨n th¹c sÜ khoa häc Nghiªn cøu ®Æc tÝnh øng dông cña vi khuÈn lactic ®Ó s¶n xuÊt thøc ¨n ch¨n nu«i Ngµnh : c«ng nghÖ sinh häc Người hướng dẫn: Nguyễn Văn Cách Vò thÞ h»ng Hµ néi 2006 Môc lôc Trang Môc lôc Danh môc c¸c ký hiÖu, c¸c ch÷ viÕt t¾t Danh môc c¸c b¶ng Danh môc c¸c h×nh vÏ vµ ®å thÞ Më ®Çu 1 PhÇn I. T×m hiÓu chung vÒ vi khuÈn lactic 5 I. S¬ lîc lÞch sö nghiªn cøu 5 I. §Æc ®iÓm chung vÒ vi khuÈn lactic 5 I.
Ph©n lo¹i vi khuÈn lactic 5 I. §Æc ®iÓm sinh lý, sinh ho¸ cña vi khuÈn lactic 6 I. Mét sè yÕu tè ¶nh hëng tíi qu¸ tr×nh sinh trëng vµ ph¸t triÓn cña vi khuÈn lactic 12 I. §Æc ®iÓm sinh lý, sinh ho¸ cña qóa tr×nh lªn men lactic 15 I.
Lªn men lactic ®ång h×nh 15 I. Lªn men lactic dÞ h×nh 16 I. Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña vi khuÈn lactic 18 I. T¸c dông kh¸ng khuÈn cña bacteriocin 19 I.
C¬ chÕ t¸c dông cña bacteriocin cña vi khuÈn lactic 22 I. øng dông cña vi khuÈn lactic 23 I. øng dông trong c«ng nghiÖp 23 I. øng dông trong c«ng nghiÖp thùc phÈm 23 I.
øng dông trong viÖc baá vÖ søc khoÎ 26 I. chÕ phÈm sinh häc (probiotics) sö dông trong ch¨n nu«I 28 I. C¬ chÕ t¸c ®éng cña probiotic 29 I. Giíi thiÖu mét sè chÕ phÈm sinh häc ë ViÖt Nam vµ trªn thÕ giíi 31 I.
Mét sè chÕ phÈm ë trong vµ ngoµi níc 31 I. ChÕ phÈm vi khuÈn lactic cho ch¨n nu«i 31 PhÇn II. NGUY£N liÖu vµ ph¬ng ph¸p nghiªn cøu 33 II.Nguyªn liÖu 34 II. §èi tîng nghiªn cøu 34 II.
Ho¸ chÊt 34 II. M«i trêng nu«i cÊy vi sinh vËt 35 II. Ph¬ng ph¸p nghiªn cøu 37 II. Ph¬ng ph¸p ph©n lËp vi khuÈn lactic 37 II.
Ph¬ng ph¸p b¶o qu¶n 37 II. Ph¬ng ph¸p x¸c ®Þnh kh¶ n¨ng sinh axit 38 II. Ph¬ng ph¸p thö ho¹t tÝnh catalaza 38 II. Ph¬ng ph¸p x¸c ®Þnh axit lactic 38 II.
X¸c ®Þnh ho¹t tÝnh kh¸ng khuÈn theo ph¬ng ph¸p cÊy chÊm ®iÓm 38 II. X¸c ®Þnh ho¹t tÝnh kh¸ng khuÈn theo ph¬ng ph¸p khuÕch t¸n th¹ch 39 II. Ph¬ng ph¸p nhËn biÕt bacteriocin 41 II. C¸c ph¬ng ph¸p quan s¸t h×nh th¸i tÕ bµo 42 II.
Ph¬ng ph¸p x¸c ®Þnh ®êng cong sinh trëng 42 II.Ph¬ng ph¸p x¸c ®Þnh kh¶ n¨ng sö dông xitrat cña vi khuÈn lactic 43 II. Ph¬ng ph¸p ®Þnh tªn vi khuÈn lactic b»ng viÖc nu«i cÊy c¸c chñng trªn m«i trêng cã c¸c lo¹i ®êng 43 II. Ph¬ng ph¸p t¹o chÕ phÈm 44 II. X¸c ®Þnh sè lîng vi sinh vËt trong chÕ phÈm 44 PhÇn III.
KÕt qu¶ vµ th¶o luËn 45 III. Ph©n lËp vi khuÈn lactic 46 III. TuyÓn chän c¸c chñng lactic cã kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn tèt 48 III. Nghiªn cøu kh¶ n¨ng kh¸ng vi sinh vËt g©y bÖnh cña 18 chñng vi khuÈn lactic 49 III.
KiÓm tra kh¶ n¨ng sinh bacteriocin cña 3 chñng ®· chän 51 III. Mét sè ®Æc ®iÓm h×nh th¸i, sinh lý, sinh ho¸ cña NC13, TC5, TC9 56 III. §èi víi chñng NC13 56 III. §èi víi chñng TC5 57 III.
§èi víi chñng TC9 57 III. §Þnh tªn c¸c chñng vi khuÈn lactic NC13, TC5, TC9 58 III. Kh¶ n¨ng sö dông xitrat cña 3 chñng 60 III. Nghiªn cøu sù ¶nh hëng cña mét sè yÕu tè tíi kh¶ n¨ng ph¸t triÓn cña 3 chñng trªn 61 III.
¶nh hëng cña nhiÖt ®é 61 III. ¶nh hëng cña pH ®Õn m«i trêng nu«i cÊy 64 III. ¶nh hëng cña hµm lîng muèi ®Õn m«i trêng nu«i cÊy 65 III. ¶nh hëng cña hµm lîng amoni ®Õn m«i trêng nu«i cÊy 66 III.
¶nh hëng cña hµm lîng ®êng ®Õn m«i trêng nu«i cÊy 67 III. Ph¬ng ph¸p t¹o chÕ phÈm 68 iv. KÕt luËn 70 §Ò nghÞ 71 TµI liÖu tham kh¶o Danh môc c¸c thuËt ng÷ vµ ký hiÖu viÕt t¾t ®îc sö dông trong luËn v¨n ch÷ viÕt t¾t ch÷ viÕt ®Çy ®ñ vd vÝ dô TT Thø tù VSV Vi sinh vËt MT M«i trêng Gram (+) Gram d¬ng Gram (-) Gram ©m IU International Unit CFU Colony Forming Unit FAD Flavin Adenin Dinucleotit EMP Embden Meyerhof Parnas C¸c lo¹i ®êng chuyÓn sang ®u«i oza (VD: Glucoza) C¸c lo¹i enzim chuyÓn sang ®u«i aza (VD: Proteinaza) C¸c tõ cha cã phiªn ©m TiÕng ViÖt chÝnh thøc ®îc gi÷ nguyªn gèc (theo chuÈn TiÕng Anh) C¸c tõ cã phiªn ©m chuÈn TiÕng ViÖt ®îc viÕt theo phiªn TiÕng ViÖt (VD: axit) Danh môc c¸c b¶ng Trang B¶ng 1. Ph©n lo¹i c¸c gièng thuéc nhãm vi khuÈn lactic 6 B¶ng 1.
Nhu cÇu axit amin cña mét sè lo¹i vi khuÈn lactic 8 B¶ng 1. Nhu cÇu vitamin cña vi khuÈn lactic 10 B¶ng 1. NhiÖt ®é ph¸t triÓn cña c¸c nhãm vi khuÈn lactic 13 B¶ng 1. C¸c kho¶ng pH cña mét sè chñng lactic 13 B¶ng 1.
C¸c ®Æc tÝnh bacteriocin cña vi khuÈn lactic 21 B¶ng 1. Mét sè thùc phÈm ®îc chÕ biÕn theo ph¬ng ph¸p lªn men 24 B¶ng 3. Nguån gèc mÉu ®îc sö dông ®Ó ph©n lËp 46 B¶ng 3. Kh¶ n¨ng ph©n gi¶i CaCO 3 cña c¸c chñng vi khuÈn 46 ph©n lËp ®îc B¶ng 3.
Kh¶ n¨ng kh¸ng L. plantarum cña 32 chñng ®· chän 48 B¶ng 3. Kh¶ n¨ng kh¸ng vi sinh vËt g©y bÖnh cña 18 chñng vi khuÈn 50 ®· chän ®îc B¶ng 3. Kh¶ n¨ng sinh bacteriocin cña c¸c chñng víi c¸c vi sinh vËt 52 g©y bÖnh B¶ng 3.
Kh¶ n¨ng lªn men c¸c lo¹i ®êng kh¸c nhau cña chñng NC13 59 B¶ng 3. ¶nh hëng cña pH ban ®Çu ®Õn tèc ®é sinh trëng cña 3 chñng 64 B¶ng 3. ¶nh hëng cña NaCl ban ®Çu ®Õn tèc ®é sinh trëng cña 3 65 chñng vi khuÈn B¶ng 3. ¶nh hëng cña (NH 4 )SO 4 ban ®Çu ®Õn tèc ®é sinh trëng 66 cña 3 chñng vi khuÈn B¶ng 3.
¶nh hëng cña hµm lîng ®êng ban ®Çu ®Õn tèc ®é sinh 67 trëng cña 3 chñng vi khuÈn B¶ng 3. Lîng tÕ bµo vi khuÈn lactic sèng sãt trong chÕ phÈm tríc 69 vµ sau khi sÊy Danh môc c¸c h×nh vÏ, ®å thÞ Trang H×nh 1. S¬ ®å chuyÓn ho¸ glucoza thµnh axit lactic b»ng con ®êng 17 lªn men lactic ®ång h×nh vµ dÞ h×nh H×nh 2. S¬ ®å x¸c ®Þnh ho¹t tÝnh kh¸ng khuÈn theo ph¬ng ph¸p 40 khuÕch t¸n th¹ch H×nh 2.
S¬ ®å nhËn biÕt bacteriocin 41 H×nh 3. H×nh ¶nh kh¶ n¨ng sinh axit cña mét sè chñng vi khuÈn 48 H×nh 3. Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña NC13 víi chØ thÞ Bacillus cereus 52 H×nh 3. Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña TC5 víi chØ thÞ B.
Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña TC9 víi chØ thÞ B. Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña NC13 víi chØ thÞ 53 Staphylococcus aureus H×nh 3. Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña TC5 víi chØ thÞ S. Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña TC9 víi chØ thÞ S.
Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña NC13 víi chØ thÞ 54 Salmonella typhimurium H×nh 3. Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña TC5 víi chØ thÞ S. Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña TC9 víi chØ thÞ S. Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña NC13 víi chØ thÞ E.
Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña TC5 víi chØ thÞ E. Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn cña TC9 víi chØ thÞ E. H×nh ¶nh khuÈn l¹c chñng NC13 trªn m«i trêng MRS 57 H×nh 3. H×nh ¶nh khuÈn l¹c chñng TC5 trªn m«i trêng MRS 58 H×nh 3.
H×nh ¶nh khuÈn l¹c chñng TC9 trªn m«i trêng MRS 58 H×nh 3. Kh¶ n¨ng sö dông xitrat cña 3 chñng vi khuÈn L. lactic TC5 61 H×nh 3. ¶nh hëng cña nhiÖt ®é ®Õn tèc ®é sinh trëng cña 62 L.
plantarum TC9 H×nh 3. ¶nh hëng cña nhiÖt ®é ®Õn tèc ®é sinh trëng cña 63 L. plantarum NC13 H×nh 3. ¶nh hëng cña nhiÖt ®é ®Õn tèc ®é sinh trëng cña 63 L.
lactic TC5 C«ng nghÖ Sinh häc 2004-2006 -1- §¹i häc B¸ch Khoa Hµ Néi Më ®Çu Lªn men lactic ®· cã tõ rÊt l©u ®êi vµ con ngêi ®· biÕt øng dông qu¸ tr×nh lªn men nµy ®Ó chÕ biÕn vµ b¶o qu¶n thùc phÈm ë kh¾p mäi n¬i trªn thÕ giíi. ë c¸c níc Ph¬ng T©y, ngêi ta ®· biÕt sö dông qu¸ tr×nh lªn men lactic ®Ó s¶n xuÊt s÷a chua, phomat, c¸c lo¹i thÞt muèi…Cßn ë c¸c níc ch©u Phi, Ên §é ®· sö dông h¹t ngò cèc lªn men lactic trong b÷a ¨n chÝnh hµng ngµy. C¸c níc ch©u ¸ còng sö dông nhiÒu thøc ¨n lªn men lactic tõ rau, qu¶, thÞt c¸. Nh Kim Chi cña TriÒu Tiªn, Nazezushi cña NhËt B¶n, da muèi, nem chua cña ViÖt Nam, Trung Quèc, Th¸i Lan.
VËy ®Ó cã ®îc nh÷ng s¶n phÈm tuyÖt vêi ®ã lµ do sù t¸c ®éng cña c¸c nhãm vi khuÈn ho¹t ®éng vµ ph¸t triÓn. Chñ yÕu lµ nhãm vi khuÈn lactic. C¸c nhµ khoa häc trªn thÕ giíi ®· nghiªn cøu vµ kh¼ng ®Þnh r»ng vi khuÈn lactic lµ nhãm vi khuÈn an toµn, lµnh tÝnh. H¬n n÷a thùc tÕ cho thÊy hµng bao nhiªu ®êi nay con ngêi chóng ta ¨n c¸c s¶n phÈm cã chøa vi khuÈn lactic ®Òu rÊt tèt.
V× ngoµi viÖc sinh axit lactic lµm t¨ng ®é axit, gi¶m pH nã cßn sinh tæng hîp ra c¸c bacteriocin vµ hÖ enzim ph©n gi¶i protein trong c¬ thÓ, t¨ng kh¶ n¨ng miÔn dÞch, tæng hîp vitamin, øc chÕ c¸c vi sinh vËt cã h¹i cho c¬ thÓ. Trªn c¬ së ®ã, ngµy nay c¸c nhµ khoa häc ®· vµ ®ang t×m ra mét híng ®i míi cho viÖc ph¸t huy u ®iÓm cña nhãm vi khuÈn lactic. §ã lµ viÖc chÕ biÕn s¶n xuÊt thøc ¨n chøc n¨ng dïng cho con ngêi vµ ®éng vËt. C¸c s¶n phÈm nµy dïng cho ngêi cã t¸c dông t¨ng cêng søc kháe, dïng cho ®éng vËt cã t¸c dông t¨ng n¨ng xuÊt vËt nu«i vµ ng¨n ngõa mét sè bÖnh do c¸c vi sinh vËt cã h¹i trong ®êng ruét g©y nªn.
MÆt kh¸c do yªu cÇu vÒ vÖ sinh an toµn thùc phÈm ngµy cµng cao, kh¸ng sinh vµ c¸c Vò ThÞ H»ng C«ng nghÖ Sinh häc 2004-2006 -2- §¹i häc B¸ch Khoa Hµ Néi ho¸ chÊt dïng lµm thøc ¨n bæ sung trong thøc ¨n cho ®éng vËt nu«i trªn c¹n vµ ®éng vËt nu«i díi níc ®îc kiÓm so¸t ngµy cµng chÆt chÏ. Kho¶ng 20 n¨m tr- íc ®©y kh¸ng sinh dïng víi mét lîng rÊt lín, hµng n¨m lîng kh¸ng sinh s¶n xuÊt ra lªn tíi 27 ngµn tÊn, 90% sè lîng nµy bæ sung vµo thøc ¨n ch¨n nu«i (theo International Poultry Production sè 1998). Kh¸ng sinh ®· t¹o ra nh÷ng dßng vi sinh vËt kh¸ng thuèc, nªn loµi ngêi ®· ph¶i tèn hµng tû ®« la ®Ó nghiªn cøu vµ t×m ra nh÷ng lo¹i kh¸ng sinh míi thay thÕ kh¸ng sinh cò ®· mÊt t¸c dông diÖt khuÈn. Ngµy nay kh¸ng sinh ®· bÞ h¹n chÕ sö dông lµm chÊt kÝch thÝch sinh trëng vµ phßng bÖnh trong ch¨n nu«i vµ nu«i trång thuû s¶n.