Nghiên Cứu Ảnh Hưởng Của Chất Kích Thích Sinh Trưởng Và Chất Hữu Cơ Tự Nhiên Đến Khả Năng Nhân Nhanh Chồi Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii)

• Tác giả: Nguyễn Thị Hằng
• Người hướng dẫn: TS. Ngô Xuân Bình
• Trường học: Đại học Thái Nguyên
• Chuyên ngành: Công nghệ sinh học
• Đề tài: Nghiên Cứu Ảnh Hưởng Của Chất Kích Thích Sinh Trưởng Đến Nhân Nhanh Chồi Lan Kim Tuyến
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2014
• Địa điểm: Thái Nguyên

• 1. PHẦN 1: MỞ ĐẦU
• 1.1. Mục đích của đề tài
• 1.2. Yêu cầu của đề tài
• 1.3. Ý nghĩa của đề tài
• 2. PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Giới thiệu chung về cây lan Kim Tuyến
• 2.2. Phân loại thực vật
• 2.3. Đặc điểm thực vật học của cây lan Kim Tuyến
• 2.4. Đặc điểm phân bố của Lan Kim Tuyến
• 2.5. Giá trị của lan Kim Tuyến
• 2.6. Khái quát về nuôi cấy mô tế bào thực vật
• 2.7. Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật
• 2.8. Cơ sở khoa học của nuôi cấy mô tế bào thực vật
• 3. PHẦN 3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. Vật liệu và phạm vi nghiên cứu
• 3.2. Vật liệu nghiên cứu. Phạm vi nghiên cứu
• 3.3. Địa điểm, thời gian nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu
• 3.4. Thời gian tiến hành
• 3.5. Hóa chất và thiết bị
• 3.6. Nội dung và phương pháp nghiên cứu
• 3.6.1. Nội dung nghiên cứu
• 3.6.2. Phương pháp nghiên cứu. Phương pháp xử lý số liệu
• 4. PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến
• 4.1.1. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ BAP đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy)
• 4.1.2. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ BAP (1,5 mg/l) kết hợp với Kinetin đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy)
• 4.1.3. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5 mg/l và Kinetine (0,3 mg/l) kết hợp với NAA đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy)
• 4.1.4. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng của khoai tây, nước dừa, chuối xanh đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến
• 4.1.5. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5 mg/l, Kinetinen(0,3mg/l), NAA (0,3 mg/l) kết hợp với nước dừa đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy)
• 4.1.6. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng lượng BAP 1,5 mg/l, Kinetine (0,3 mg/l), NAA (0,3 mg/l) kết hợp với khoai tây đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy)
• 4.1.7. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5 mg/l, Kinetine (0,3 mg/l), NAA (0,3 mg/l), kết hợp với chuối xanh đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy)
• 5. PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

I. Tổng Quan Nghiên Cứu Về Lan Kim Tuyến Kích Thích Sinh Trưởng

Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) là dược liệu quý, đang bị khai thác cạn kiệt. Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến nhân nhanh chồi lan kim tuyến là cấp thiết. Mục tiêu là tìm ra phương pháp nhân giống lan kim tuyến hiệu quả, bảo tồn nguồn gen. Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật được ứng dụng để tạo ra số lượng lớn cây giống, chất lượng đồng đều. Nghiên cứu này tập trung vào ảnh hưởng của các hormone sinh trưởng thực vật và chất hữu cơ tự nhiên đến khả năng phát triển chồi lan kim tuyến trong điều kiện in vitro. Kết quả sẽ góp phần vào quy trình nhân giống lan kim tuyến hiệu quả, phục vụ sản xuất và bảo tồn.

1.1. Giới thiệu chung về cây Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii

Lan Kim Tuyến thuộc họ Lan (Orchidaceae), phân bố rộng ở Việt Nam. Có 12 loài, trong đó Anoectochilus roxburghii là loài có giá trị dược liệu cao. Lan Kim Tuyến có khả năng chữa trị nhiều bệnh như ung thư, cao huyết áp, và các bệnh về xương khớp. Ngoài ra, còn được dùng làm cảnh. Do khai thác quá mức, Lan Kim Tuyến đang đối mặt với nguy cơ tuyệt chủng và được xếp vào nhóm cần bảo tồn. Việc nhân giống lan kim tuyến bằng phương pháp in vitro là giải pháp hiệu quả để bảo tồn và phát triển loài cây này.

1.2. Giá trị dược liệu và kinh tế của Lan Kim Tuyến

Lan Kim Tuyến có giá trị kinh tế cao do tác dụng dược liệu và làm cảnh. Giá bán trên thị trường thế giới của Lan Kim Tuyến khô là 3,200 USD/kg. Cây tươi có giá từ 300-320 USD/kg. Lan Kim Tuyến chứa nhiều hoạt chất quý như axit 4-hydroxycinnamic, β-sitosterol, và kinsenoside. Theo y học cổ truyền Đài Loan, Lan Kim Tuyến có tác dụng trị đau ngực, đau bụng, viêm thận, sốt, cao huyết áp, và các bệnh về gan. Dịch chiết Lan Kim tuyến có khả năng kháng virus, kháng sưng viêm, bảo vệ gan, chống khối u, và điều trị bệnh tim mạch.

II. Thách Thức Trong Nhân Giống Lan Kim Tuyến Giải Pháp

Việc nhân giống lan kim tuyến gặp nhiều khó khăn do tốc độ sinh trưởng chậm và nguồn giống tự nhiên ngày càng khan hiếm. Các phương pháp nhân giống truyền thống không đáp ứng được nhu cầu sản xuất. Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật mở ra hướng đi mới, nhưng cần tối ưu hóa quy trình để tăng hiệu quả. Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng và chất hữu cơ tự nhiên đến khả năng nhân nhanh chồi lan kim tuyến trong điều kiện in vitro. Mục tiêu là tìm ra công thức môi trường và phương pháp nuôi cấy tối ưu, giúp tăng năng suất lan kim tuyến và giảm chi phí sản xuất.

2.1. Tình hình nghiên cứu nhân giống Lan Kim Tuyến trên thế giới

Trên thế giới, nhiều nghiên cứu đã được thực hiện về nhân giống lan kim tuyến bằng phương pháp in vitro. Các nhà khoa học đã thử nghiệm nhiều loại hormone sinh trưởng thực vật và môi trường nuôi cấy khác nhau để tối ưu hóa quy trình. Trung Quốc, Đài Loan, và Nhật Bản là những nước đi đầu trong việc sản xuất và xuất khẩu Lan Kim Tuyến. Các nghiên cứu tập trung vào việc tăng tỷ lệ nảy mầm, phát triển chồi, và tạo rễ trong điều kiện in vitro. Tuy nhiên, vẫn còn nhiều thách thức cần giải quyết để đạt được hiệu quả kinh tế cao.

2.2. Tình hình nghiên cứu nhân giống Lan Kim Tuyến ở Việt Nam

Ở Việt Nam, nghiên cứu về nhân giống lan kim tuyến còn hạn chế. Một số công trình đã được công bố, nhưng chưa có quy trình nhân giống hoàn chỉnh và hiệu quả. Các nghiên cứu thường tập trung vào việc khảo sát ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân nhanh chồi. Tuy nhiên, cần có thêm nhiều nghiên cứu để đánh giá ảnh hưởng của chất hữu cơ tự nhiên, môi trường nuôi cấy, và các yếu tố khác đến sự tăng trưởng lan kim tuyến. Việc phát triển quy trình nhân giống lan kim tuyến hiệu quả là cần thiết để bảo tồn và phát triển nguồn dược liệu quý này.

III. Phương Pháp Nghiên Cứu Ảnh Hưởng Của BAP Đến Nhân Chồi

Nghiên cứu này sử dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật để đánh giá ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân nhanh chồi lan kim tuyến. Thí nghiệm được thực hiện trong điều kiện vô trùng, với môi trường dinh dưỡng được kiểm soát chặt chẽ. Các nồng độ khác nhau của BAP (6-Benzylaminopurine) được sử dụng để đánh giá ảnh hưởng đến số lượng chồi, chiều cao chồi, và chất lượng chồi. Kết quả được phân tích thống kê để xác định nồng độ BAP tối ưu cho việc nhân giống lan kim tuyến.

3.1. Vật liệu và phạm vi nghiên cứu trong phòng thí nghiệm

Vật liệu nghiên cứu là chồi Lan Kim Tuyến được thu thập từ cây mẹ khỏe mạnh. Phạm vi nghiên cứu bao gồm việc đánh giá ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng BAP đến khả năng nhân nhanh chồi trong điều kiện in vitro. Nghiên cứu được thực hiện tại phòng nuôi cấy mô của Viện Khoa học Sự sống, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên. Thời gian tiến hành nghiên cứu từ tháng 1/2014 đến tháng 5/2014.

3.2. Quy trình thí nghiệm và phương pháp xử lý số liệu

Quy trình thí nghiệm bao gồm các bước: chuẩn bị môi trường nuôi cấy, khử trùng mẫu, cấy mẫu vào môi trường, nuôi cấy trong điều kiện kiểm soát, và theo dõi sự phát triển chồi. Các chỉ tiêu theo dõi bao gồm số lượng chồi, chiều cao chồi, số lượng lá, và tình trạng sinh trưởng của chồi. Số liệu được thu thập và xử lý bằng phần mềm thống kê để đánh giá ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân nhanh chồi lan kim tuyến.

3.3. Các loại hóa chất và thiết bị sử dụng trong nghiên cứu

Nghiên cứu sử dụng các loại hóa chất như BAP, Kinetin, NAA, MS, và các chất hữu cơ tự nhiên như nước dừa, khoai tây, chuối xanh. Thiết bị sử dụng bao gồm tủ cấy vô trùng, nồi hấp tiệt trùng, máy lắc, máy đo pH, và các dụng cụ thí nghiệm khác. Tất cả các hóa chất và thiết bị đều được kiểm tra chất lượng và đảm bảo hoạt động tốt trước khi sử dụng.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Ảnh Hưởng Của BAP Đến Nhân Nhanh Chồi

Kết quả nghiên cứu cho thấy BAP có ảnh hưởng đáng kể đến khả năng nhân nhanh chồi lan kim tuyến. Nồng độ BAP tối ưu là 1,5 mg/l, cho số lượng chồi cao nhất sau 35 ngày nuôi cấy. Việc kết hợp BAP với Kinetin và NAA cũng có ảnh hưởng tích cực đến sự phát triển chồi. Tuy nhiên, ảnh hưởng của các chất hữu cơ tự nhiên như nước dừa, khoai tây, và chuối xanh không rõ rệt bằng BAP. Kết quả này cung cấp cơ sở khoa học cho việc tối ưu hóa quy trình nhân giống lan kim tuyến bằng phương pháp in vitro.

4.1. Ảnh hưởng của nồng độ BAP đến số lượng chồi

Nghiên cứu cho thấy nồng độ BAP có ảnh hưởng lớn đến số lượng chồi được tạo ra. Nồng độ BAP 1,5 mg/l cho số lượng chồi cao nhất (trung bình 5,2 chồi/mẫu). Các nồng độ BAP thấp hơn hoặc cao hơn đều cho số lượng chồi thấp hơn. Điều này cho thấy cần có nồng độ BAP phù hợp để kích thích sự phát triển chồi của Lan Kim Tuyến.

4.2. Ảnh hưởng của BAP kết hợp Kinetin đến chiều cao chồi

Việc kết hợp BAP (1,5 mg/l) với Kinetin (0,3 mg/l) có ảnh hưởng tích cực đến chiều cao chồi. Chiều cao chồi trung bình đạt 2,5 cm sau 35 ngày nuôi cấy. Kinetin giúp tăng cường ảnh hưởng của BAP, thúc đẩy sự phát triển chiều cao của chồi Lan Kim Tuyến.

4.3. Ảnh hưởng của BAP Kinetin NAA và chất hữu cơ

Việc kết hợp BAP, Kinetin, NAA và các chất hữu cơ tự nhiên như nước dừa, khoai tây, chuối xanh có ảnh hưởng đến khả năng nhân nhanh chồi. Tuy nhiên, ảnh hưởng của các chất hữu cơ tự nhiên không rõ rệt bằng BAP, Kinetin và NAA. Cần có thêm nghiên cứu để đánh giá ảnh hưởng của các chất hữu cơ tự nhiên này một cách chi tiết hơn.

V. Ứng Dụng Thực Tiễn Kết Luận Về Nhân Giống Lan Kim Tuyến

Kết quả nghiên cứu này có ý nghĩa quan trọng trong việc phát triển quy trình nhân giống lan kim tuyến hiệu quả. Việc sử dụng BAP với nồng độ tối ưu (1,5 mg/l) và kết hợp với Kinetin và NAA giúp tăng số lượng chồi và chiều cao chồi. Quy trình này có thể được ứng dụng trong sản xuất cây giống Lan Kim Tuyến với số lượng lớn, chất lượng đồng đều, và giá thành hợp lý. Điều này góp phần vào việc bảo tồn và phát triển nguồn dược liệu quý này.

5.1. Ứng dụng kết quả nghiên cứu vào sản xuất cây giống

Kết quả nghiên cứu có thể được ứng dụng vào sản xuất cây giống Lan Kim Tuyến với số lượng lớn. Quy trình nhân giống bằng phương pháp in vitro giúp tạo ra cây giống đồng đều về chất lượng và giữ được đặc tính di truyền của cây mẹ. Điều này rất quan trọng trong việc cung cấp nguồn giống chất lượng cao cho người trồng.

5.2. Đề xuất các nghiên cứu tiếp theo để tối ưu quy trình

Cần có thêm nghiên cứu để đánh giá ảnh hưởng của các yếu tố khác như ánh sáng, nhiệt độ, và độ ẩm đến sự phát triển của chồi Lan Kim Tuyến. Ngoài ra, cần nghiên cứu về ảnh hưởng của các loại phân bón cho lan kim tuyến và môi trường nuôi cấy mô lan kim tuyến khác nhau để tối ưu hóa quy trình nhân giống.