Khảo sát nuôi cấy phôi cây cóc đỏ Lumnitzera littorea Jack Voigt 1845 in vitro

LỜI CẢM ƠN

TÓM TẮT LUẬN VĂN

ABSTRACT

LỜI CAM ĐOAN

1. CHƯƠNG 1: TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI

1.1. Luận điểm mới của đề tài

1.2. Mục tiêu nghiên cứu

1.2.1. Mục tiêu chung

1.2.2. Mục tiêu cụ thể

1.3. Nội dung nghiên cứu

1.4. Giới hạn của đề tài

2. CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1. Phân loại khoa học

2.2. Đặc điểm sinh học, sinh thái và phân bố của loài Cóc đỏ

2.3. Những khó khăn trong công tác bảo tồn và phục hồi quần thể Cóc đỏ

2.4. Kỹ thuật nuôi cấy phôi thực vật

2.4.1. Phôi thực vật

2.4.2. Lịch sử nuôi cấy phôi thực vật

2.4.3. Giới thiệu kỹ thuật nuôi cấy phôi

2.5. Ứng dụng của nuôi cấy phôi

2.5.1. Nuôi cấy phôi yếu

2.5.2. Nuôi cấy phôi lai

2.6. Các yếu tố ảnh hưởng đến sự phát triển phôi

2.6.1. Môi trường nuôi cấy

2.6.2. Điều kiện nuôi cấy

2.6.3. Sự nảy mầm của hạt

2.6.4. Hình thức sinh sản của cây ngập mặn

2.7. Vật liệu và phương pháp

2.7.1. Thuyết minh sơ đồ nghiên cứu

3. CHƯƠNG 3: THÍ NGHIỆM KHẢO SÁT TÍNH SỐNG CỦA PHÔI CÂY CÓC ĐỎ

3.1. Xử lý hạt Cóc đỏ trước khi cấy

3.2. Kỹ thuật tách lấy hạt Cóc đỏ

3.3. Kỹ thuật vô trùng bề mặt hạt Cóc đỏ

3.4. Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của môi trường khoáng đến sự phát triển của phôi cây

3.5. Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của nồng độ sucrose đến sự phát triển của phôi cây

3.6. Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến sự phát triển của phôi cây Cóc đỏ

3.7. Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của nồng độ GAs đến sự phát triển của phôi cây Cóc đỏ

3.8. Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của nồng độ IAA đến sự phát triển của phôi cây Cóc đỏ

3.9. Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của nồng độ BA đến sự phát triển của phôi cây Cóc đỏ

3.10. Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của tỷ lệ nồng độ IAA:BA đến sự phát triển của phôi cây Cóc đỏ

3.11. Chỉ tiêu đo đạc sự phát triển của phôi Cóc đỏ

3.12. Khảo sát ảnh hưởng của độ mặn đến sự tăng trưởng của cây con Cóc đỏ

3.13. Chỉ tiêu đo đạc sự tăng trưởng của cây con Cóc đỏ

3.14. Phương pháp xử lý số liệu

4. CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

4.1. Tính sống của phôi cây Cóc đỏ

4.2. Ảnh hưởng của quá trình vô trùng bề mặt hạt đến tính sống của phôi Cóc đỏ

4.3. Sự nảy mầm của hạt Cóc đỏ in vitro

4.4. Ảnh hưởng của môi trường khoáng đến sự phát triển của phôi cây Cóc đỏ

4.5. Ảnh hưởng của nồng độ sucrose đến sự phát triển của phôi cây Cóc đỏ

4.6. Ảnh hưởng của chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến sự phát triển của phôi cây Cóc đỏ

4.7. Ảnh hưởng của nồng độ GAs đến sự phát triển của phôi cây Cóc đỏ

4.8. Ảnh hưởng của nồng độ IAA đến sự phát triển của phôi cây Cóc đỏ

4.9. Ảnh hưởng của nồng độ BA đến sự phát triển của phôi cây Cóc đỏ

4.10. Ảnh hưởng của tỷ lệ nồng độ IAA:BA đến sự phát triển của phôi cây Cóc đỏ

4.11. Sự tăng trưởng của cây Cóc đỏ con thu được

4.12. Khảo sát ảnh hưởng của độ mặn đến sự tăng trưởng của cây con Cóc đỏ

4.13. Ảnh hưởng của độ mặn đến tỷ lệ sống của cây con

4.14. Ảnh hưởng của độ mặn đến tăng trưởng của cây con

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

DANH MỤC HÌNH

DANH MỤC BẢNG

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT

I. Nuôi cấy phôi

Nghiên cứu tập trung vào nuôi cấy phôi của cây cóc đỏ (Lumnitzera littorea) trong điều kiện in vitro. Mục tiêu chính là tìm ra phương pháp tối ưu để kích thích phôi phát triển thành cây con, nhằm bảo tồn loài cây quý hiếm này. Phương pháp nuôi cấy phôi được áp dụng để khắc phục tình trạng tỷ lệ nảy mầm thấp trong tự nhiên. Các yếu tố như môi trường khoáng, nồng độ sucrose, và chất điều hòa sinh trưởng được khảo sát để tối ưu hóa quá trình nuôi cấy.

1.1. Môi trường nuôi cấy

Môi trường MS (Murashige & Skoog) được sử dụng làm nền tảng cho quá trình nuôi cấy phôi. Nghiên cứu chỉ ra rằng sự kết hợp giữa IAA (0.5 mg/l) và BA (0.5 mg/l) hoặc GA3 (1.5 mg/l) mang lại hiệu quả cao nhất cho sự nảy mầm của phôi. Nồng độ sucrose 20 g/l cũng được xác định là tối ưu cho sự phát triển của phôi.

1.2. Điều kiện nuôi cấy

Phôi được nuôi cấy trong điều kiện tối, nhiệt độ 25 ± 2°C, và pH 5.8. Sau khi phôi nảy mầm, cây con được chuyển sang điều kiện ánh sáng 2.500 ± 100 lux, nhiệt độ 30 ± 2°C, và độ mặn 0‰. Cây con duy trì tỷ lệ sống 100% sau 3 tháng, đạt chiều cao trung bình 2.103 cm và có 1 lá thật.

II. Cây cóc đỏ và bảo tồn

Cây cóc đỏ (Lumnitzera littorea) là loài cây ngập mặn quý hiếm, có giá trị kinh tế và sinh thái cao. Tuy nhiên, loài này đang đối mặt với nguy cơ tuyệt chủng do tác động của con người và thiên nhiên. Nghiên cứu này nhằm mục đích bảo tồn và phục hồi quần thể cây cóc đỏ thông qua kỹ thuật nuôi cấy phôi in vitro.

2.1. Đặc điểm sinh học

Cây cóc đỏ là cây gỗ nhỡ, cao từ 2-15 m, với lá hình trái xoan ngược và hoa màu đỏ. Loài này phân bố chủ yếu ở vùng ngập mặn cửa sông ven biển, nơi có độ mặn thấp và đất sét hơi chặt. Hạt của cây cóc đỏ có tỷ lệ nảy mầm rất thấp trong tự nhiên, chỉ khoảng 2% sau 3 tháng gieo.

2.2. Khó khăn trong bảo tồn

Quần thể cây cóc đỏ bị phân mảnh và cô lập do các hoạt động của con người như phá rừng ngập mặn để xây dựng ao nuôi thủy sản và phát triển cơ sở hạ tầng. Ngoài ra, cây con trong tự nhiên thường bị cua, còng cắn đứt, làm giảm khả năng tái sinh tự nhiên của loài.

III. Kỹ thuật sinh học và ứng dụng

Nghiên cứu sử dụng các kỹ thuật sinh học hiện đại để nuôi cấy phôi và tạo cây con in vitro. Phương pháp này không chỉ giúp bảo tồn loài cây cóc đỏ mà còn mở ra tiềm năng ứng dụng trong việc nhân giống các loài cây ngập mặn khác.

3.1. Phương pháp nghiên cứu

Nghiên cứu bao gồm các thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của môi trường khoáng, nồng độ sucrose, và chất điều hòa sinh trưởng đến sự phát triển của phôi. Các chỉ tiêu đo đạc bao gồm tỷ lệ nảy mầm, chiều cao cây con, và tỷ lệ sống sau 3 tháng nuôi cấy.

3.2. Giá trị thực tiễn

Kết quả nghiên cứu có giá trị thực tiễn cao trong việc bảo tồn và phục hồi các quần thể cây cóc đỏ trong tự nhiên. Phương pháp nuôi cấy phôi in vitro cũng có thể được áp dụng cho các loài cây ngập mặn khác, góp phần bảo vệ đa dạng sinh học và hệ sinh thái ven biển.

Khảo Sát Khả Năng Nuôi Cấy Phôi Cây Cóc Đỏ Lumnitzera Littorea Jack Voigt 1845 In Vitro