Luận văn: Cơ sở di truyền tính chống chịu thiệt hại môi trường ở cây lúa

• Tác giả: Bùi Chí Bửu
• Trường học: Viện Lúa Đồng Bằng Sông Cửu Long
• Chuyên ngành: Di truyền học
• Đề tài: Cơ sở di truyền tính chống chịu đối với thiệt hại do môi trường của cây lúa
• Loại tài liệu: Luận văn tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2003
• Địa điểm: Thành phố Hồ Chí Minh

Tóm tắt

I. Tổng quan về cơ sở di truyền tính chống chịu cây lúa

Cây lúa là lương thực chính của hơn nửa dân số thế giới. Biến đổi khí hậu tạo ra nhiều thách thức nghiêm trọng. Hạn hán, mặn hóa, ngập úng gây thiệt hại lớn cho sản xuất. Hiểu cơ sở di truyền tính chống chịu là then chốt. Di truyền học phân tử mở ra hướng nghiên cứu mới. Phương pháp đánh dấu phân tử (marker) hỗ trợ xác định gen liên quan. QTL (Quantitative Trait Loci) là các vùng nhiễm sắc thể ảnh hưởng tính trạng số lượng. Nghiên cứu QTL giúp lập bản đồ gen chống chịu. Từ đó xây dựng cơ sở chọn giống hiệu quả. Giống lúa kháng chịu có năng suất ổn định hơn. Bà con nông dân giảm rủi ro mất mùa. An ninh lương thực được đảm bảo bền vững. Nghiên cứu di truyền tính chống chịu đóng vai trò nền tảng cho ngành lúa gạo hiện đại.

1.1. Khái niệm tính chống chịu ở cây lúa

Tính chống chịu là khả năng cây lúa sống sót dưới điều kiện bất lợi. Stress môi trường bao gồm mặn, hạn, lạnh, ngập. Cây có cơ chế tránh hoặc chịu đựng stress. Cơ chế tránh giúp cây thoát khỏi tác nhân gây hại. Cơ chế chịu đựng cho phép cây tồn tại khi stress diễn ra. Mỗi loại stress tác động lên sinh lý cây khác nhau. Tính chống chịu chịu kiểm soát bởi nhiều gen. Hiểu rõ khái niệm này là bước đầu trong nghiên cứu chọn giống kháng chịu.

1.2. Vai trò của di truyền học phân tử trong nghiên cứu chống chịu

Di truyền học phân tử giúp xác định vị trí gen trên nhiễm sắc thể. Công nghệ marker DNA tạo ra công cụ mạnh mẽ. RFLP, SSR, SNP là các loại marker phổ biến. Chúng liên kết với gen mục tiêu theo nguyên tắc di truyền liên kết. Khoảng cách di truyền giữa marker và gen đo bằng centiMorgan. Tần suất tái tổ hợp càng thấp thì liên kết càng chặt. Phương pháp này thay thế cách chọn giống truyền thống. Nghiên cứu phân tử rút ngắn thời gian tạo giống mới. Độ chính xác cao hơn so với phương pháp hình thái học.

II. Phân tích phương pháp xác định QTL chống chịu

Phương pháp phân tích QTL là trọng tâm của nghiên cứu. QTL định vị trên bản đồ di truyền nhờ marker liên kết. Có nhiều phương pháp phân tích khác nhau. Phép thử t đơn giản so sánh nhóm kiểu gen marker. Phân tích phương sai đánh giá ảnh hưởng marker lên tính trạng. Phương trình tuyến tính mô hình hóa mối quan hệ gen-hình. Phương pháp SMA (Single Marker Analysis) là bước khởi đầu. Mô hình tuyến tính Y = μ + f(marker) + ε được áp dụng rộng rãi. Giá trị Y là tính trạng mục tiêu của cá thể thứ j. μ là giá trị trung bình quần thể. Hàm f(marker) phản ánh ảnh hưởng kiểu gen marker. Sai số ε đại diện cho biến động ngẫu nhiên. Phương pháp này đơn giản nhưng hiệu quả cao. Phần mềm SAS hỗ trợ thiết lập mô hình phân tích. Kết quả chỉ ra vị trí và cường độ ảnh hưởng của QTL.

2.1. Phương pháp phân tích marker đơn SMA

Phân tích marker đơn kiểm tra từng marker riêng lẻ. Mô hình dựa trên hàm tuyến tính giữa marker và tính trạng. Quần thể hồi giao thường được sử dụng trong SMA. Bố mẹ thuần chéo AAQQ giao với aaqq tạo con lai F1. Con lai F1 giao ngược với aaqq tạo quần thể hồi giao. Tần suất kiểu gen phụ thuộc vào tần suất tái tổ hợp r. Giá trị r càng nhỏ thì liên kết càng chặt. SMA dễ thực hiện và tính toán nhanh. Tuy nhiên phương pháp này bỏ sót ảnh hưởng tương tác giữa các marker.

2.2. Phân tích QTL đa marker trên bản đồ di truyền

Phương pháp đa marker phân tích nhiều marker cùng lúc. Ảnh hưởng của marker liên kết trên cùng nhiễm sắc thể được đánh giá. Cách tiếp cận này nhạy hơn so với SMA. Bảng tổng hợp các đoạn nhiễm sắc thể điều khiển tính trạng. Bốn vùng C560-C747, R3156-C397, C1454-C397, G24-R1684 có ảnh hưởng ý nghĩa. Tính trạng SD được kiểm soát bởi nhiều đoạn trên nhiễm sắc thể số 2. Tính trạng RW liên quan đến đoạn trên nhiễm sắc thể số 3. Phương pháp đa marker cho kết quả toàn diện hơn.

III. Giải pháp ứng dụng chọn giống lúa chống chịu môi trường

Chọn giống hỗ trợ phân tử (MAS) là giải pháp tiên tiến. MAS sử dụng marker DNA để chọn cây mang gen mong muốn. Phương pháp này không cần chờ cây biểu hiện tính trạng. Thời gian chọn giống rút ngắn đáng kể. Chỉ cần phân tích DNA từ lá non là đủ. Cây mang allele chống chịu được chọn ngay từ giai đoạn sớm. Giống Tesanai 2 mang allele ký hiệu T có tính chống chịu cao. Giống CB mang allele ký hiệu C biểu hiện hướng kiểu hình khác. DPE (Direction of Phenotypic Effect) xác định xu hướng ảnh hưởng allele. Kết hợp nhiều QTL cải thiện hiệu quả chọn lọc. Chọn lọc tích lũy allele kháng từ nhiều nguồn gen khác nhau. Giống mới vừa kháng mặn vừa có năng suất cao. Ứng dụng MAS giúp nông dân tiếp cận giống tốt nhanh hơn. Chi phí sản xuất giảm, lợi nhuận tăng. Đây là hướng đi bền vững cho ngành lúa gạo.

3.1. Xây dựng giống lúa kháng mặn bằng marker phân tử

Kháng mặn là ưu tiên hàng đầu ở vùng ven biển. QTL liên quan đến kháng mặn được xác định trên nhiều nhiễm sắc thể. Các tính trạng mục tiêu bao gồm SD, RW, hàm lượng K+. Bảng tổng hợp cho thấy nhiều đoạn nhiễm sắc thể kiểm soát tính trạng SD. Tính trạng trọng lượng chồi và hàm lượng K+ chịu ảnh hưởng hẹp hơn. Chỉ một quãng của bản đồ di truyền tác động. Việc kết hợp các QTL kháng mặn cần kế hoạch lai tạo cẩn thận. Marker hỗ trợ theo dõi sự di truyền allele qua các thế hệ.

3.2. Chiến lược kết hợp nhiều tính trạng chống chịu

Lúa thường chịu nhiều loại stress đồng thời. Kết hợp kháng mặn và kháng hạn là cần thiết. Mỗi tính trạng liên quan đến tập QTL riêng. Một số vùng nhiễm sắc thể ảnh hưởng đồng thời nhiều tính trạng. Ví dụ C560-C747 tác động lên hai tính trạng mục tiêu cùng lúc. Đây là cơ hội chọn lọc tổng hợp hiệu quả. Nhà nghiên cứu cần xây dựng bản đồ QTL chi tiết. Chiến lược kim tự tháp (pyramiding) tích lũy allele ưu tú. Kết quả là giống đa kháng phục vụ sản xuất thực tế.

IV. Kết luận và triển vọng nghiên cứu di truyền lúa chống chịu

Nghiên cứu cơ sở di truyền tính chống chịu đã đạt tiến bộ lớn. Phương pháp QTL và marker DNA chứng minh hiệu quả. Nhiều vùng gen liên quan đến kháng mặn, hạn, lạnh được xác định. MAS trở thành công cụ chính trong chọn giống hiện đại. Tuy nhiên vẫn còn nhiều thách thức phía trước. Tương tác gen-môi trường phức tạp hơn dự đoán ban đầu. Ứng dụng thực tế đòi hỏi giống thích nghi rộng. Nghiên cứu cần mở rộng nguồn gen đa dạng. Bộ sưu tập giống bản địa chứa allele quý hiếm chưa được khai thác hết. Công nghệ giải trình tự thế hệ mới tăng tốc phát hiện gen. Chỉnh sửa gen CRISPR-Cas9 mở ra khả năng cải thiện tính chống chịu trực tiếp. Sự hợp tác giữa nhà nghiên cứu và nông dân là yếu tố quyết định. Triển vọng ngành lúa gạo bền vững phụ thuộc vào nghiên cứu di truyền học phân tử.

4.1. Hạn chế hiện tại của nghiên cứu QTL chống chịu

Nghiên cứu QTL vẫn đối mặt nhiều hạn chế. Quần thể ánh xạ có kích thước nhỏ thường bỏ sót QTL phụ. Hiệu ứng QTL phụ thuộc vào nền di truyền và môi trường. Kết quả từ phòng thí nghiệm chưa luôn áp dụng được ngoài đồng. Tương tác epistatic giữa các QTL phức tạp. Chi phí phân tích marker cao ở quy mô lớn. Cần phát triển marker giá rẻ, dễ sử dụng. Đào tạo nguồn nhân lực phân tử tại các viện nghiên cứu là cấp bách.

4.2. Triển vọng công nghệ mới trong chọn giống lúa

Giải trình tự toàn bộ genome giúp phát hiện gen mới nhanh chóng. Dữ liệu lớn (big data) hỗ trợ phân tích hàng nghìn mẫu cùng lúc. Học máy (machine learning) dự đoán kiểu hình từ dữ liệu gen. Công nghệ SNP chip tạo marker đồng nhất cho toàn genome. Chỉnh sửa gen CRISPR-Cas9 cho phép sửa đổi gen mục tiêu trực tiếp. Không cần thời gian lai tạo truyền thống nhiều thế hệ. Hiệp hội genome (GWAS) mở rộng quy mô nghiên cứu quần thể tự nhiên. Công nghệ mới rút ngắn chu kỳ tạo giống từ 10 năm xuống còn 3-5 năm.

Trích đoạn nội dung tài liệu

BÙI CHÍ BỬU - NGUYỄN THỊ LANG CƠ SỞ DI TRUYỀN TÍNH CHỐNG CHỊU ĐỐI VỚI THIỆT HẠI DO MÔI TRƯỜNG CỦA CÂY LÚA NHÀ XUẤT BẢN NÔNG NGHIỆP Thành phố Hồ chí Minh 2003 Mangh■■ng Luôn 123doc Th■a thu■n l■icam s■tr■ h■u k■t s■ nghi■m t■im■t d■ng là s■website mang kho m■i 1. th■ m■ l■i d■n CH■P ■■u vi■n nh■ng cho kh■ng ng■■i NH■N quy■n chia dùng, l■ CÁC và■I■U s■l■i v■it■t công h■n mua nh■t 2.000 ngh■ bán KHO■N cho tàihi■n ng■■i li■u TH■A tài th■ hàng li■u ■■u ■ t■t dùng. hi■n THU■N■■i, Khi Vi■t c■ khách b■n l■nh Nam. Chào online hàng v■c: Tác m■ng tr■ không tài phong thành b■n chính■■n khác chuyên thành tíngì d■ng, v■i so nghi■p, viên 123doc. v■i công c■a b■n hoàn ngh■ 123doc g■c. và■■ h■o, thông B■n n■p có tin, cao th■ ti■n ngo■i tính phóng vào ng■,.Khách trách tài to,kho■n nhi■m thu nh■■■i c■a hàng tùy123doc, v■i ý. cót■ng th■b■n d■ ng■■i ■■■c dàng s■ dùng. tra c■u M■c h■■ng tàitiêu li■u m■t■■u nh■ng hàng quy■n cáchc■a chính l■i123doc.net sau xác,n■p nhanh ti■n tr■ chóng. trên thành th■ vi■n tài li■u online l■n nh■t Vi■t Nam, cung c■p nh■ng tài li■u ■■c không th■ tìm th■y trên th■ tr■■ng ngo■i tr■ 123doc. website Nhi■u event thú v■, event ki■m ti■n thi■t th■c. 123doc luôn luôn t■o c■ h■i gia t■ng thu nh■p online cho t■t c■ các thành viên c■a website. Mangh■n Luôn Th■a Xu■t Sau Nhi■u 123doc khi h■■ng phát thu■n l■i event cam s■ nh■n m■t tr■ t■ h■u k■t s■ thú nghi■m t■i ýxác n■m t■■ng m■t d■ng v■, là s■nh■n■■i, website ra mang event kho m■i 1. t■ot■ th■ m■■■ng l■i c■ng ki■m d■n 123doc CH■P ■■u ■■ng vi■n nh■ng cho ti■n h■■ã kh■ng ng■■i NH■N quy■n th■ng thi■t chia t■ng ki■m dùng, l■ CÁC s■ th■c. s■ l■i b■■c v■i■I■U ti■n vàchuy■n t■t công h■n mua 123doc online kh■ng nh■t ■■nh 2.000 ngh■ bán KHO■N sang b■ng luôn cho tài hi■n ng■■i li■u ph■n luôn tài TH■A tài v■ th■ li■u hàng t■o li■u thông dùng. ■■u ■ tin tríhi■n THU■N hi■u c■ c■a ■■i, t■t h■i Khi qu■ mình Vi■t xác c■ khách gia b■n nh■t, minh trong l■nh Nam. t■ng Chào online hàng uy tài v■c: l■nh thu Tác m■ng tín kho■n tr■ nh■p không tài phong v■c caothành b■n chính ■■n email nh■t. tài online khác chuyên li■u thành tínb■n Mong gì cho d■ng, và v■i so■ã ■■ng nghi■p, viên kinh t■t 123doc.net! v■i mu■n công c■a c■ doanh b■n các hoàn mang ngh■ 123doc ký g■c. thành v■i h■o, Chúng l■i ■■ thông B■n và ■■n 123doc.netLink cho viên Tính n■p có tôi tin, c■ng c■a cao th■ cung ti■n ngo■i■■ng tính website. phóng th■i vào c■p ■i■m ng■,.Khách trách xác tài D■ch xã to,kho■n th■c nhi■m h■i ■■i thutháng V■ nh■ m■t s■ c■a■■■c (nh■ hàng tùy ■■■c ngu■n 5/2014; 123doc, v■i ý. cóg■i t■ng th■ tài 123doc v■ mô ■■a nguyên b■n d■ ng■■i t■ dàng s■ ■■■c v■■t d■■i tri dùng. ch■tra■ây) th■c m■c email c■u M■c h■■ng quý 100.000 cho tài b■n tiêu báu, li■u■ã b■n, ■■ng nh■ng hàng ■■u phong m■t l■■t tùyquy■n cách truy thu■c phú, ky,■a c■a c■p chính l■i b■n vào 123doc.net m■i d■ng, sau xác, các vuingày, n■p lòng “■i■u nhanh giàu■■ng ti■n s■ tr■ giá Kho■n chóng. h■u trên thành tr■ ■■ng nh■p 2.000 website Th■a th■ email vi■n th■i Thu■n c■a thành mong tài v■ li■u mình viên mu■n S■ ■■ng online và D■ng click t■o l■n■i■u ký, D■ch vào nh■t l■t link ki■n V■” vào Vi■t 123doc top sau cho ■ây Nam,■ã 200 cho cung các các (sau ■âynh■ng g■iwebsite c■p users ■■■c cóph■ thêm tài bi■n g■ithu li■u t■t■■c nh■t nh■p. T■it■i không t■ng Chính Vi■tth■i th■ Nam,■i■m, vì v■y tìm t■123doc.net th■y l■chúng tìm trên ki■m tôi th■ ■■i racóthu■c tr■■ng th■nh■m c■p top ■áp ngo■i 3nh■t ■KTTSDDV ■ng Google. Nh■n nhu c■utheo chiaquy■t danh s■ tài hi■u .li■udo ch■t c■ng ■■ng l■■ng vàbình ki■mch■n ti■n là online. website ki■m ti■n online hi■u qu■ và uy tín nh■t. Luônh■n 123doc Sau Th■a Xu■tkhi h■■ng phát thu■n cam nh■n m■tt■k■t s■ t■i ýxác n■m t■■ng d■ng là s■ nh■n■■i, website ra mang 1. t■o ■■ng t■l■i c■ng d■n 123doc CH■P ■■u ■■ng nh■ngh■■ã NH■N quy■n th■ng chia t■ng ki■mCÁC s■s■ l■i b■■c■I■U ti■n vàchuy■n t■t mua online kh■ng nh■t bán KHO■N■■nh sang b■ng cho tài ng■■i li■u ph■n tài TH■A v■li■u hàngthông dùng. ■■u tríTHU■N hi■u c■atin Khi qu■ mình Vi■t xác khách nh■t, minh trong Nam. Chào hàng uy tài l■nh Tác m■ng tín kho■n tr■ phong v■c caothành b■n ■■n email nh■t. tàichuyên li■u thành b■n Mong và v■i ■ã ■■ng nghi■p, viên kinh 123doc.net! mu■n c■a doanh hoàn mang 123doc kýonline. v■i h■o, Chúng l■ivà ■■ ■■n 123doc.netLink cho Tính n■p tôi c■ng cao cung ti■n ■■ng tính th■i vào c■p ■i■m trách xác tài D■ch xãkho■n th■c nhi■m ■■i h■itháng V■m■t s■ c■a■■■c (nh■ ■■■c ngu■n 5/2014; 123doc, v■i g■i t■ng tài 123doc v■ mô ■■a nguyên b■n ng■■i t■s■ v■■t d■■i■■■c tri dùng. ch■ ■ây) th■c m■c email M■c h■■ng quý 100.000 chob■n tiêu báu, ■ã b■n, ■■ng nh■ng hàng ■■u phong l■■t tùyquy■n truy thu■c phú, ky,■a c■a c■pl■i b■n vào 123doc.net m■i d■ng, sau các vuingày, n■p lòng “■i■u giàu■■ng ti■n s■ tr■ giá Kho■n h■u trên thành tr■ ■■ng nh■p 2.000 website Th■a th■ email vi■n th■i Thu■n c■a thành mong tài v■ li■u mình viên mu■n S■ ■■ng online và D■ng click t■o l■n■i■u ký, D■ch vào nh■t l■t link ki■n V■” vào Vi■t 123doc top sau cho Nam,■ây ■ã 200 cho cung các các (sau ■âynh■ng g■iwebsite c■p users ■■■c cóph■ thêm tài bi■n g■ithu li■u t■t■■c nh■t nh■p. T■it■i không t■ng Chính Vi■tth■i th■ Nam, ■i■m, vì v■y tìm t■123doc.net th■y l■chúng tìm trên ki■m tôi th■ ■■i racóthu■c tr■■ng th■nh■m c■p top ■áp ngo■i 3nh■t ■KTTSDDV ■ng Google. Nh■n nhu c■utheo chiaquy■t danh s■ tàihi■u .li■udo ch■t c■ng ■■ng l■■ng vàbình ki■mch■n ti■n là online. website ki■m ti■n online hi■u qu■ và uy tín nh■t. Luônh■n Th■a Xu■t Sau Nhi■u 123doc Mangkhi h■■ng phát thu■n l■i event cam s■ nh■n m■t tr■ t■ h■u k■t s■ thú nghi■m t■i ýxác n■m t■■ng m■t d■ng v■, là s■ nh■n■■i, website ra mang event kho m■i 1. t■ot■ th■ m■■■ng l■i c■ng ki■m d■n 123doc CH■P ■■u ■■ng vi■n nh■ng cho ti■n h■■ã kh■ng ng■■i NH■N quy■n th■ng thi■t chia t■ng ki■m dùng, l■ CÁC s■ th■c. s■ l■i b■■c v■i■I■U ti■n vàchuy■n t■t công h■n mua 123doc online kh■ng nh■t ■■nh 2.000 ngh■ bán KHO■N sang b■ng luôn cho tài hi■n ng■■i li■u ph■n luôn tài TH■A tài v■ th■ li■u hàng t■o li■u thông dùng. ■■u ■ tin tríhi■n THU■N hi■u c■ c■a ■■i, t■t h■i Khi qu■ mình Vi■t xác c■ khách gia b■n nh■t, minh trong l■nh Nam. t■ng Chào online hàng uy tài v■c: l■nh thu Tác m■ng tín kho■n tr■ nh■p không tài phong v■c caothành b■n chính ■■n email nh■t. tài online khác chuyên li■u thành tínb■n Mong gì cho d■ng, và v■i so■ã ■■ng nghi■p, viên kinh t■t 123doc.net! v■i mu■n công c■a c■ doanh b■n các hoàn mang ngh■ 123doc ký g■c. thành v■i h■o, Chúng l■i thông B■n và ■■ ■■n 123doc.netLink cho viên Tính n■p có tôi tin, c■ng c■a cao th■ cung ti■n ngo■i■■ng tính website. phóng th■i vào c■p ■i■m ng■,.Khách trách xác tài D■ch xã to,kho■n th■c nhi■m h■i ■■i thutháng V■ nh■ m■t s■ c■a■■■c (nh■ hàng tùy ■■■c ngu■n 5/2014; 123doc, v■i ý. cóg■i t■ng th■ tài 123doc v■ mô ■■a nguyên b■n d■ ng■■i t■ dàng s■ v■■t d■■i■■■c tri dùng. ch■ tra■ây) th■c m■c email c■u M■c h■■ng quý 100.000 cho tài b■n tiêu báu, li■u■ã b■n, ■■ng nh■ng hàng ■■u phong m■t l■■t tùyquy■n cách truy thu■c phú, ky,■a c■a c■p chính l■i b■n vào 123doc.net m■i d■ng, sau xác, các vuingày, n■p lòng “■i■u nhanh giàu■■ng ti■n s■ tr■ giá Kho■n chóng. h■u trên thành tr■ ■■ng nh■p 2.000 website Th■a th■ email vi■n th■i Thu■n c■a thành mong tài v■ li■u mình viên mu■n S■ ■■ng online và D■ng click t■o l■n■i■u ký, D■ch vào nh■t l■t link ki■n V■” vào Vi■t 123doc top sau cho Nam,■ây ■ã 200 cho cung các các (sau ■âynh■ng g■iwebsite c■p users ■■■c cóph■ thêm tài bi■n g■ithu li■u t■t■■c nh■t nh■p. T■it■i không t■ng Chính Vi■tth■i th■ Nam, ■i■m, vì v■y tìm t■123doc.net th■y l■chúng tìm trên ki■m tôi th■ ■■i racóthu■c tr■■ng th■nh■m c■p top ■áp ngo■i 3nh■t ■KTTSDDV ■ng Google. Nh■n nhu c■utheo chiaquy■t danh s■ tàihi■u .li■udo ch■t c■ng ■■ng l■■ng vàbình ki■mch■n ti■n là online. website ki■m ti■n online hi■u qu■ và uy tín nh■t. u■t phát Nhi■u Mang Luôn 123doc Th■a Xu■t Sau khi h■n h■■ng phát thu■n l■i event s■ cam nh■n t■ m■t tr■ t■ h■u ýk■t s■ thú nghi■m t■i ýt■■ng xác n■m t■■ng m■t d■ng v■, là s■ nh■n■■i, website ra mang event t■o kho m■i 1. t■ot■ ■■ng c■ng th■ m■ l■i c■ng ki■m d■n ■■ng 123doc CH■P ■■u ■■ng vi■n nh■ng cho ti■n h■■ã kh■ng ng■■i NH■N quy■n th■ng thi■t chia ki■m t■ng ki■m dùng, l■ CÁC s■ th■c. ti■n s■ l■i b■■c v■i■I■U ti■n vàchuy■n t■t công online h■n mua 123doc online kh■ng nh■t ■■nh 2.000 ngh■ bán KHO■N b■ng sang b■ng luôn cho tài hi■n tài ng■■i li■u ph■n luôn tài TH■A li■u tài v■ th■ li■u hàng t■o li■u thông dùng. trí hi■u hi■n■■u ■ tin THU■N hi■u c■ c■a ■■i, qu■ t■t h■i Khi qu■ mình Vi■t xác c■ khách gia nh■t, b■n nh■t, minh trong l■nh Nam. t■ng Chào online uy hàng uy tài v■c: l■nh thu Tác tín m■ng tín kho■n tr■ cao nh■p không tài phong v■c caothành b■n chính nh■t. tài online khác chuyên li■u thành tín Mong b■n Mong gì cho d■ng, và v■i so■ã ■■ng nghi■p, viên kinh mu■n t■t 123doc.net! v■i mu■n công c■a c■ doanh b■n mang các hoàn mang ngh■ 123doc ký g■c. thành v■i l■i h■o, Chúng l■i thông B■n cho và ■■ ■■n ■■ng 123doc.netLink cho viên Tính n■p có c■ng tôi tin, c■ng c■a cao th■ cung ti■n ngo■i■■ng tính website. phóng th■i vào c■p ■i■m ng■,.Khách trách xác xã tài D■ch xã to,h■i kho■n th■c nhi■m h■i thum■t ■■i tháng V■ nh■ m■t s■ c■a■■■c (nh■ hàng ngu■n tùy ■■■c ngu■n 5/2014; 123doc, v■i ý. cótài g■i t■ng th■ tài 123doc■■a nguyên v■ mô nguyên b■n d■ ng■■i t■ dàng s■ v■■t tri d■■i■■■c tri dùng. ch■ th■c tra■ây) th■c m■c email c■u quý M■c h■■ng quý 100.000 cho tài báu, b■n tiêu báu, li■u■ã b■n, ■■ng nh■ng phong hàng ■■u phong m■t l■■t tùyphú, quy■n cách truy ■a thu■c phú, ky,■a c■a c■p chính l■i b■n vào d■ng, 123doc.net m■i d■ng, sau xác, các vuingày, n■p giàu lòng “■i■u nhanh giàu■■ng ti■n giá s■ tr■ giá Kho■n chóng. h■u tr■ trên■■ng thành tr■ ■■ng nh■p 2.000 website Th■a th■ email th■i vi■n th■i Thu■n mong c■a thành mong tài v■ li■u mình mu■n viên mu■n S■ ■■ng online và D■ng t■o ■i■u click t■o l■n■i■u ký, D■ch vào nh■t l■t link ki■n ki■n V■” vào Vi■t 123doc cho top sau cho Nam,■ây cho■ã 200 cho cung các các các (sau g■i ■âynh■ng users website c■p users có■■■c cóph■ thêm thêm tài bi■n g■i thu thu li■u t■t■■c nh■p. T■it■i Chính không t■ng Chính Vi■tth■i vìth■ Nam, ■i■m, vìv■y v■y tìm 123doc.net th■y l■chúng tìm trên ki■m tôi ra th■ ■■i racó■■i thu■c tr■■ng th■ nh■m nh■m c■p top ■áp ■áp ngo■i ■ng 3nh■t ■KTTSDDV ■ng Google. nhu Nh■n nhuc■u c■uchia theo chias■ quy■t danh s■tàitài hi■u li■u .li■uch■t do ch■t c■ng ■■ng l■■ng l■■ng vàvàki■m bình ki■mch■n ti■n ti■nonline.