Luận Văn Thạc Sĩ Công Nghệ Hóa Học: Nghiên Cứu Phân Lập Và Đánh Giá Flavonoid Trong Cao Lá Bạch Quả

Luận văn thạc sĩ công nghệ hóa học tập trung nghiên cứu phân lập và xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid trong cao lá bạch quả.

• Tác giả: Phan Huy Vũ
• Người hướng dẫn: Huỳnh Khánh Duy
• Trường học: Đại học Bách Khoa - Đại học Quốc gia TP. Hồ Chí Minh
• Chuyên ngành: Công nghệ hóa học
• Đề tài: Nghiên cứu phân lập và xây dựng phương pháp đánh giá các flavonoid trong cao lá bạch quả
• Loại tài liệu: luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2014
• Địa điểm: TP. Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CÁM ƠN
• LỜI CAM ĐOAN
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
• 1.1. Giới thiệu chung về cây bạch quả
• 1.2. Tên gọi
• 1.3. Mô tả thực vật
• 1.4. Thành phần hóa học
• 1.5. Dược tính và công dụng
• 2. CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Đối tượng nghiên cứu
• 2.2. Dung môi, hóa chất
• 2.3. Thiết bị - Dụng cụ
• 2.4. Phương pháp nghiên cứu
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ - NHẬN XÉT
• 3.1. Chiết xuất và phân lập flavonoid trong lá bạch quả
• 3.2. Định danh dược liệu lá bạch quả
• 3.3. Chiết xuất cao flavonoid toàn phần từ lá bạch quả
• 3.4. Định tính cao flavonoid bằng sắc ký lớp mỏng
• 3.5. Thiết lập sắc ký đồ vân tay cao flavonoid
• 3.6. Xác định cấu trúc các chất phân lập
• 3.7. Tham định quy trình định lượng quercetin, kaempferol và isorhamnetin bằng phương pháp HPLC
• 3.7.1. Khảo sát tính tuyến tính
• 3.7.2. Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ)
• 3.7.3. Khảo sát tính tương thích hệ thống
• 3.7.4. Khảo sát tính chọn lọc
• 3.7.5. Khảo sát độ lặp lại
• 3.8. Ứng dụng quy trình đã xây dựng để định tính và định lượng quercetin, kaempferol và isorhamnetin trong các chế phẩm
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• PHỤ LỤC
• DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT
• DANH MỤC CÁC BẢNG
• DANH MỤC CÁC HÌNH

Tóm tắt

I. Giới thiệu chung về cây bạch quả

Bạch quả (Ginkgo biloba) là một loại cây có nguồn gốc từ Trung Quốc, được biết đến với tên gọi khác là ngân hạnh. Cây thuộc họ Ginkgoaceae, chi Ginkgo, có thân gỗ lớn, cao từ 20-35 m, tán nhọn và cành dài gồ ghề. Lá bạch quả có hình quạt, gân lá tỏa ra thành phiến lá, dài khoảng 5-10 cm. Hạt bạch quả có hình trứng, vỏ cứng, màu vàng nhạt hoặc xám nhạt. Cây được trồng rộng rãi ở nhiều nơi trên thế giới, bao gồm Châu Âu và Châu Mỹ.

1.1. Thành phần hóa học

Thành phần hóa học của lá bạch quả bao gồm các flavonoid như quercetin, kaempferol, và isorhamnetin, cùng với các terpen lacton như ginkgolid A, B, C, J, M và bilobalid. Ngoài ra, lá còn chứa các hợp chất khác như sterol, acid hữu cơ, và các dẫn chất catechin. Hạt bạch quả chứa carbohydrate, protein, và lipid, trong đó tinh bột là thành phần chính. Các nghiên cứu gần đây đã chỉ ra rằng các hợp chất này có tác dụng sinh học quan trọng, đặc biệt là trong việc hỗ trợ hệ tuần hoàn và thần kinh.

II. Phương pháp nghiên cứu

Luận văn tập trung vào việc phân lập và đánh giá các flavonoid trong cao lá bạch quả. Quy trình nghiên cứu bao gồm việc chiết xuất cao ethanol từ lá bạch quả, sau đó sử dụng các phương pháp sắc ký để phân lập và xác định cấu trúc của các hợp chất flavonoid. Phương pháp HPLC được sử dụng để định lượng các chất này trong các chế phẩm có chứa bạch quả.

2.1. Chiết xuất và phân lập flavonoid

Quá trình chiết xuất được thực hiện bằng cách sử dụng hỗn hợp acetone-nước để thu được cao lá bạch quả. Sau đó, các flavonoid được phân lập bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) và sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Hai hợp chất chính được phân lập là isorhamnetin và kaempferol, được sử dụng làm chất đối chiếu để đánh giá chất lượng các chế phẩm.

III. Kết quả và đánh giá

Kết quả nghiên cứu cho thấy việc phân lập thành công hai flavonoid chính là isorhamnetin và kaempferol từ cao lá bạch quả. Phương pháp HPLC được xây dựng để định lượng các chất này trong các chế phẩm có chứa bạch quả. Kết quả này có ý nghĩa quan trọng trong việc kiểm soát chất lượng các sản phẩm dược liệu từ bạch quả trên thị trường.

3.1. Ứng dụng thực tiễn

Nghiên cứu này đã góp phần nâng cao tính pháp lý và chất lượng của các chế phẩm có chứa bạch quả. Việc xây dựng phương pháp đánh giá các flavonoid giúp kiểm soát chặt chẽ hơn các sản phẩm dược liệu, đảm bảo an toàn và hiệu quả cho người sử dụng. Đây là bước tiến quan trọng trong việc ứng dụng công nghệ hóa học vào lĩnh vực dược liệu.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Cây bạch quả (Ginkgo biloba), còn gọi là ngân hạnh, là một dược liệu quý có nguồn gốc từ Trung Quốc, được trồng rộng rãi tại nhiều quốc gia, trong đó có Việt Nam. Lá bạch quả chứa các hợp chất flavonoid và terpenoid có tác dụng sinh học quan trọng, hỗ trợ cải thiện tuần hoàn máu, tăng cường chức năng não bộ và phòng ngừa các bệnh lý liên quan đến tuổi già như Alzheimer. Theo ước tính, cao lá bạch quả chứa khoảng 22–27% flavonol glycoside và 5–7% terpen, trong đó các flavonoid chính gồm quercetin, kaempferol và isorhamnetin. Tuy nhiên, hiện nay trên thị trường chưa có phương pháp chuẩn để đánh giá chất lượng các chế phẩm chứa cao bạch quả, gây khó khăn trong kiểm soát chất lượng và đảm bảo hiệu quả điều trị.

Luận văn thạc sĩ này nhằm mục tiêu nghiên cứu phân lập các flavonoid chính trong cao lá bạch quả và xây dựng phương pháp đánh giá định tính, định lượng các flavonoid này bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Nghiên cứu được thực hiện trong khoảng thời gian từ tháng 1 đến tháng 6 năm 2014 tại Trường Đại học Bách Khoa, Đại học Quốc gia TP. Hồ Chí Minh. Việc thiết lập sắc ký đồ vân tay và xác định cấu trúc các flavonoid sẽ góp phần nâng cao chất lượng kiểm tra các sản phẩm chứa cao bạch quả trên thị trường, đồng thời hỗ trợ phát triển các tiêu chuẩn dược liệu trong ngành công nghệ hóa học.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Luận văn dựa trên các lý thuyết và mô hình nghiên cứu sau:

• Lý thuyết flavonoid và terpenoid trong dược liệu: Flavonoid là nhóm hợp chất polyphenol có hoạt tính sinh học mạnh, bao gồm các aglycone như quercetin, kaempferol và isorhamnetin. Terpenoid, đặc biệt là diterpen lacton như ginkgolid và bilobalid, là các thành phần đặc trưng của bạch quả với tác dụng bảo vệ thần kinh và tuần hoàn.
• Mô hình sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC): Phương pháp phân tích định tính và định lượng các hợp chất trong hỗn hợp phức tạp dựa trên sự tương tác giữa mẫu và pha tĩnh, pha động. HPLC được sử dụng với đầu dò PDA và khối phổ IT-TOF để xác định cấu trúc và hàm lượng flavonoid.
• Khái niệm sắc ký đồ vân tay (Fingerprint Chromatography): Thiết lập mẫu sắc ký đặc trưng của cao bạch quả để phân biệt với các dược liệu khác, giúp kiểm soát chất lượng và phát hiện hàng giả.
• Phương pháp chiết phân tán đa pha rắn (MSPD): Kỹ thuật chiết xuất flavonoid hiệu quả, tiết kiệm dung môi và thời gian, giữ nguyên cấu trúc các hợp chất.
• Các chỉ tiêu đánh giá phương pháp phân tích: Tính tuyến tính, giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn định lượng (LOQ), độ lặp lại, độ đúng và tính chọn lọc theo quy định của Dược điển Việt Nam IV.

Phương pháp nghiên cứu

• Nguồn dữ liệu: Nguyên liệu chính là lá bạch quả khô thu mua từ Viện Y học Cổ truyền, cùng các chế phẩm chứa cao bạch quả trên thị trường. Chuẩn flavonoid gồm quercetin, kaempferol và isorhamnetin được cung cấp bởi Viện Kiểm nghiệm thuốc TP. Hồ Chí Minh.
• Phương pháp chiết xuất và phân lập: Lá bạch quả được xay nhuyễn, chiết xuất bằng ethanol theo phương pháp Soxhlet, cô đặc thu cao ethanol thô. Cao được xử lý loại tạp bằng n-hexan, thủy phân acid HCl 10% ở 95°C trong 1 giờ, chiết xuất flavonoid bằng ethyl acetate, thu cao flavonoid tinh khiết (cao FL1). Phân lập flavonoid bằng sắc ký cột silica gel với hệ dung môi thích hợp.
• Phương pháp phân tích: Xác định cấu trúc flavonoid bằng phổ hồng ngoại (IR), cộng hưởng từ hạt nhân (NMR), sắc ký lỏng khối phổ IT-TOF. Định tính và định lượng flavonoid bằng HPLC với cột C18, pha động gồm acid phosphoric 0,2% và methanol hoặc acetonitrile, bước sóng phát hiện 340–370 nm.
• Khảo sát tính tuyến tính, LOD, LOQ, độ lặp lại, độ đúng và tính chọn lọc: Thực hiện trên các dung dịch chuẩn với nồng độ từ 0,007 đến 0,34 mg/mL, chạy lặp lại 6 lần, thêm chuẩn vào mẫu thử để đánh giá độ phục hồi.
• Timeline nghiên cứu: Nghiên cứu được tiến hành trong 6 tháng, từ tháng 1 đến tháng 6 năm 2014, bao gồm các bước chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc, xây dựng và thẩm định phương pháp HPLC.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Phân lập thành công hai flavonoid chính: Isorhamnetin và kaempferol được phân lập từ cao lá bạch quả với độ tinh khiết trên 95% xác định bằng HPLC và DSC. Hiệu suất chiết flavonoid tinh khiết đạt khoảng 15% so với cao ethanol thô, tương đương 7,8 g từ 52 g cao ethanol.
2. Thiết lập sắc ký đồ vân tay đặc trưng: Phương pháp HPLC với cột C18, pha động acid phosphoric 0,2% – methanol – acetonitrile, tốc độ dòng 1,0 mL/phút, bước sóng 340 nm đã thiết lập được sắc ký đồ vân tay đặc trưng cho cao bạch quả, giúp phân biệt với các dược liệu khác như hoa hòe.
3. Phương pháp định lượng flavonoid có tính tuyến tính cao: Hệ số tương quan (r²) của quercetin, kaempferol và isorhamnetin lần lượt là 0,998, 0,997 và 0,995 trong khoảng nồng độ 0,007–0,34 mg/mL. Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) lần lượt đạt 0,007–0,02 mg/mL và 0,03–0,06 mg/mL.
4. Độ lặp lại và độ đúng của phương pháp đạt yêu cầu: Độ lệch chuẩn tương đối (RSD) dưới 3,5% cho các flavonoid, tỷ lệ phục hồi từ 98% đến 102%, chứng tỏ phương pháp có độ chính xác và độ tin cậy cao.
5. Ứng dụng thành công trong đánh giá các chế phẩm trên thị trường: Hàm lượng quercetin, kaempferol và isorhamnetin trong các viên nén và cao bạch quả thương mại dao động từ 3,59 đến 125,21 µg/mg, phù hợp với tiêu chuẩn dược liệu.

Thảo luận kết quả

Kết quả phân lập flavonoid phù hợp với các nghiên cứu trước đây, khẳng định isorhamnetin và kaempferol là các chất chỉ điểm quan trọng trong cao bạch quả. Sắc ký đồ vân tay được thiết lập giúp phân biệt chính xác cao bạch quả với các dược liệu tương tự, nâng cao hiệu quả kiểm soát chất lượng. Phương pháp HPLC với điều kiện sắc ký tối ưu cho phép định lượng chính xác các flavonoid với độ nhạy cao, đáp ứng các yêu cầu của Dược điển Việt Nam.

So sánh với các nghiên cứu quốc tế, phương pháp này có ưu điểm về tính đơn giản, độ chính xác và khả năng áp dụng rộng rãi trong kiểm nghiệm dược liệu. Việc ứng dụng phương pháp vào đánh giá các sản phẩm thương mại giúp phát hiện sự biến động hàm lượng flavonoid, từ đó đề xuất cải tiến quy trình sản xuất và kiểm soát chất lượng. Dữ liệu có thể được trình bày qua biểu đồ sắc ký vân tay và bảng so sánh hàm lượng flavonoid trong các mẫu thử, minh họa rõ ràng sự khác biệt và tính ổn định của sản phẩm.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Áp dụng phương pháp HPLC đã xây dựng làm tiêu chuẩn kiểm tra chất lượng cao bạch quả: Các cơ sở sản xuất và kiểm nghiệm nên triển khai phương pháp này để đảm bảo hàm lượng flavonoid trong sản phẩm đạt chuẩn, nâng cao uy tín và hiệu quả điều trị. Thời gian thực hiện: trong vòng 6 tháng.
2. Phát triển bộ chuẩn đối chiếu flavonoid chuẩn hóa: Cần sản xuất và phân phối các chuẩn flavonoid (quercetin, kaempferol, isorhamnetin) chất lượng cao để hỗ trợ công tác kiểm nghiệm. Chủ thể thực hiện: Viện Kiểm nghiệm thuốc và các đơn vị nghiên cứu dược liệu.
3. Tăng cường đào tạo kỹ thuật viên và cán bộ kiểm nghiệm: Đào tạo chuyên sâu về kỹ thuật sắc ký lỏng và phân tích flavonoid nhằm nâng cao năng lực phân tích và đảm bảo tính chính xác của kết quả. Thời gian: 3-6 tháng.
4. Xây dựng quy trình chuẩn trong sản xuất cao bạch quả: Các nhà sản xuất cần áp dụng quy trình chiết xuất và tinh chế flavonoid theo tiêu chuẩn đã nghiên cứu để ổn định chất lượng sản phẩm. Chủ thể: các công ty dược liệu và nhà máy sản xuất.
5. Mở rộng nghiên cứu đánh giá các thành phần khác trong cao bạch quả: Nghiên cứu thêm các terpenoid và acid ginkgolic để hoàn thiện tiêu chuẩn hóa dược liệu, đảm bảo an toàn và hiệu quả. Thời gian: 1-2 năm.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Các nhà nghiên cứu và sinh viên ngành công nghệ hóa học, dược học: Luận văn cung cấp phương pháp phân lập và phân tích flavonoid chi tiết, giúp nâng cao kiến thức và kỹ năng nghiên cứu dược liệu.
2. Cơ quan kiểm nghiệm thuốc và dược liệu: Tài liệu là cơ sở khoa học để xây dựng tiêu chuẩn kiểm tra chất lượng các sản phẩm chứa cao bạch quả, phục vụ công tác quản lý nhà nước.
3. Doanh nghiệp sản xuất và kinh doanh dược liệu, thực phẩm chức năng: Giúp cải tiến quy trình sản xuất, kiểm soát chất lượng sản phẩm, tăng cường uy tín trên thị trường.
4. Bác sĩ và chuyên gia y học cổ truyền: Cung cấp thông tin về thành phần hoạt chất và hiệu quả sinh học của cao bạch quả, hỗ trợ tư vấn và lựa chọn sản phẩm phù hợp cho bệnh nhân.

Câu hỏi thường gặp

1. Phương pháp phân lập flavonoid trong cao bạch quả có ưu điểm gì?
   Phương pháp chiết xuất bằng ethanol kết hợp thủy phân acid và sắc ký cột silica gel giúp thu được flavonoid tinh khiết với độ tinh khiết trên 95%, hiệu suất chiết cao và giữ nguyên cấu trúc hoạt chất, phù hợp cho nghiên cứu và ứng dụng kiểm nghiệm.

2. Sắc ký đồ vân tay có vai trò gì trong kiểm tra chất lượng dược liệu?
   Sắc ký đồ vân tay tạo ra mẫu đặc trưng của cao bạch quả, giúp phân biệt với các dược liệu giả mạo hoặc kém chất lượng, từ đó đảm bảo tính chính xác và độ tin cậy trong kiểm nghiệm sản phẩm.

3. Phương pháp HPLC được sử dụng như thế nào để định lượng flavonoid?
   HPLC với cột C18, pha động acid phosphoric 0,2% kết hợp methanol hoặc acetonitrile, bước sóng phát hiện 340–370 nm, cho phép xác định chính xác hàm lượng quercetin, kaempferol và isorhamnetin với độ nhạy cao và độ lặp lại tốt.

4. Hàm lượng flavonoid trong các chế phẩm thương mại có sự khác biệt lớn không?
   Có sự biến động hàm lượng flavonoid trong các sản phẩm trên thị trường, dao động từ 3,59 đến 125,21 µg/mg, phản ánh sự khác biệt về nguồn nguyên liệu và quy trình sản xuất, do đó cần kiểm soát chất lượng chặt chẽ.

5. Làm thế nào để nâng cao chất lượng các sản phẩm chứa cao bạch quả?
   Cần áp dụng phương pháp phân tích chuẩn, xây dựng quy trình sản xuất chuẩn hóa, đào tạo nhân lực kỹ thuật và phát triển bộ chuẩn đối chiếu flavonoid để đảm bảo hàm lượng hoạt chất ổn định và hiệu quả điều trị.

Kết luận

• Phân lập thành công hai flavonoid chính isorhamnetin và kaempferol từ cao lá bạch quả với độ tinh khiết trên 95%.
• Thiết lập sắc ký đồ vân tay đặc trưng giúp phân biệt cao bạch quả với các dược liệu khác.
• Xây dựng phương pháp HPLC định lượng flavonoid có tính tuyến tính cao, độ nhạy và độ chính xác phù hợp với tiêu chuẩn dược điển.
• Ứng dụng phương pháp vào đánh giá các chế phẩm thương mại cho thấy sự biến động hàm lượng flavonoid, cần kiểm soát chất lượng chặt chẽ.
• Đề xuất áp dụng phương pháp làm tiêu chuẩn kiểm nghiệm, phát triển bộ chuẩn đối chiếu và nâng cao năng lực kiểm nghiệm trong ngành dược liệu.

Tiếp theo, cần triển khai áp dụng phương pháp trong các phòng kiểm nghiệm, đồng thời mở rộng nghiên cứu các thành phần hoạt chất khác trong cao bạch quả để hoàn thiện tiêu chuẩn hóa dược liệu. Quý độc giả và các đơn vị quan tâm được khuyến khích tham khảo và ứng dụng kết quả nghiên cứu nhằm nâng cao chất lượng sản phẩm và hiệu quả điều trị.

Trích đoạn nội dung tài liệu

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP. HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHAN HUY VŨ NGHIÊN CUU PHAN LẬP VÀ XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP DANH GIA CÁC FLAVONOID TRONG CAO LA BACH QUA Chuyên ngành : Cong nghệ hóa học Mã s6:605275 LUẬN VÁN THẠC SĨ TP. HỎ CHÍ MINH, tháng 07 năm 2014. CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BACH KHOA —DHQG -HCM Cán bộ hướng dẫn khoa học : TS.

Huỳnh Khánh Duy TS. Tống Thanh Danh Cán bộ cham nhận xét Ï :. Cán bộ cham nhận xét 2 :.- SG Set Sa S1 E28 E98 E9EE2EE58 5588581811855 5E55 2e. Luan văn thạc sĩ được bảo vệ tại Trường Dai học Bách Khoa, DHQG Tp.

Thanh phan Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vi của Hội đông châm bảo vệ luận văn thạc si) Xác nhận của Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV và Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau khi luận văn đã được sửa chữa (nêu có). CHỦ TỊCH HỘI ĐÔNG TRƯỞNG KHOA. ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRUONG ĐẠI HOC BACH KHOA Độc lap - Tự do - Hanh phúc NHIEM VU LUAN VAN THAC Si Ho tên học viên: Phan Huy Vũ MSHV:11050160 Ngày, tháng, năm sinh: 22/10/1986 Nơi sinh: Tp. Hồ Chí Minh Chuyên ngành: Công nghệ hóa học Mã số : 605275 I.

TÊN ĐÈ TÀI: « NGHIÊN CUU PHAN LAP VÀ XÂY DỰNG PHƯƠNG PHAP DANH GIÁ CÁC FLAVONOID TRONG CAO LA BACH QUA » II. NHIỆM VU VA NOI DUNG: - Thiết lập sắc ky đồ vân tay của dược liệu bach quả. - Cô lập chất đánh giá trên cao ethanol. - Xác định cấuu trúc chất đánh giá.

- Ung dung chất đánh dấu dé đánh dấu xác định hàm lượng chất trong chế phẩm. NGÀY GIAO NHIỆM VU: 20/01/2014. NGÀY HOÀN THÀNH NHIEM VU: 20/06/2014. CÁN BỘ HUONG DAN : TS.

Huỳnh Khánh Duy TS. Tống Thanh Danh Tp. CAN BO HUONG DAN CHU NHIEM BO MON DAO TAO (Ho tén va chit ky) (Ho tén va chit ky) TRUONG KHOA. (Ho tén va chit ky) Nghiên cứu phân lập và xây dung phương pháp đánh giả các flavonoid trong cao bạch qua LỜI CÁM ƠN cle Trong quá trình thực hiện luận văn nay, tôi đã nhận được sự giúp đỡ vô cùng quý báu của quý thầy cô trường Đại học Bách khoa Tp.HCM, các anh chi, các bạn Vật lý Do lường — Viện Kiểm nghiệm thuốc Tp HCM.

gia đình và bạn bè về sự động viên, giúp đỡ trong suốt quá trình thực hiện luận văn. Tôi xin tỏ lòng biết ơn chân thành đến: - TS. Huỳnh Khánh Duy, TS. Tống Thanh Danh đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ tôi rất nhiều trong quá trình nghiên cứu và thực hiện đề tài.

- Quy thay cô trường Dai học Bách khoa Tp.HCM đã tận tình giảng dạy và giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và thực hiện đề tài. — Phong Đào tạo Sau đại học — Dai học Khoa Học Bách khoa Tp.HCM đã tao điều kiện tốt cho tôi trong suốt khóa học va thời gian thực hiện dé tai. - (Cac anh chị, các bạn khoa Vật lý Do lường — Viện Kiếm nghiệm thuốc Tp.HCM đã giúp đỡ tôi rất nhiều trong quá trình thực hiện đề tài. - Ban lãnh đạo, các anh chị khoa Đông dược - Dược liệu, , khoa Thiết lập Chất chuẩn - Viện Kiểm nghiệm thuốc Tp.HCM đã cộng tác va tạo điều kiện cho tôi thực hiện luận văn này.

— Gia đình va bạn bè đã luôn động viên và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu. Xin chân thành cam ơn Nghiên cứu phân lập và xây dung phương pháp đánh giả các flavonoid trong cao bạch qua TOM TAT Dé tài “ Nghiên cứu va xây dung phương pháp đánh giá các flavonoid trong cao bach quả” đã phân lập được hai flavonoid chính trong cao bach qua là isorhamnetin va kaempferol. Từ đó, xây dựng quy trình đánh giá chất lượng cao bạch qua góp phan phục vụ cho công tác kiểm tra chất lượng các chế phẩm có thành phân cao lá bạch quả trên thị trường. SUMMARY Thesis “Study and establishment validation method of flavonoids in Ginkgo biloba extract” isolated two main flavonoids in ginkgo biloba extract which are isorhamnetin and kaempferol.

Therefrom, quality validate procedure of ginkgo biloba extract was established for contribution of quality control of ginkgo biloba extract-containing products in the market Nghiên cứu phân lập và xây dung phương pháp đánh giả các flavonoid trong cao bạch qua LOI CAM DOAN Tôi xin cam đoan day là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được công bố trong bất kì công trình nào khác. -HI- Nghiên cứu phân lập và xây dung phương pháp đánh giả các flavonoid trong cao bạch qua MỤC LỤC LOL CAM 9. aằẼ i ¡900 91 ii LOI CAM DOAN oieecccccscsssssesesesecscscsessecscscsesesescscscscsesscssscsesesesesssescscscscssscssscsesessseecseses iii MUC LUC 22 iv DANH MỤC CAC CHU VIET TAT o.cccccccccccescscscscscsescscscscscscsssesssesssssesssssssessseseeeees vi DANH MỤC CAC BẢNG.--- + c2 211111 211111111 2111111111111 011101010 11010101 ưu viii DANH MỤC CÁC HÌNH.

L1 TS 1 111111111 111111011101010101 111111111101 11 1111110101010 010111 1H ràg xii CHUONG 1: TONG QUAN. G2121 12v 11T 1T 1T TT TH reg | 1. Giới thiệu chung về cao bạch quả. - - - - + 3xx E SE SE rvcke | II hNHa((cctc.

— Mô tả thực vật. Thành phần hóa hoc. + St S18 E11 1111 1 51 511111 11g ng ri Il 1. Duroc tinh và công dụng ou.

----- c c c c1 S9 2S ĐH HH ng cv ra Vil 1. Những nghiên cứu khoa học gan đây:.-- - - - scE SE vs kg eree IX 1. Một số chế phẩm sử dung bạch qua làm nguyên liệu thành phần. xXxI CHƯƠNG 2: DOI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.

Đối tượng nghiên CỨU. Gv SE 1S 11T TT ng ng ng ưu XXIl si B25êi. Dung môi, hóa chất.- 6 SE 1k SE vn ng xXII 2. _ Thiết bị - Dụng cỤ.--G- G11 1n HT ng HH xXII -iv- Nghiên cứu phân lập và xây dung phương pháp đánh giả các flavonoid trong cao bạch qua 2.

Phương pháp nghiÊn CỨU. Chiết xuất va phân lập flavonoid trong lá bach qua. Dinh tính, định lượng các flavonoid trong cao bạch qua CP1. XXVIII CHUONG 3: KET QUA - NHAN XET.

Chiết xuất và phân lập flavonoid trong lá bach qua. Định danh dược liệu lá bạch quả. _ Chiết xuất cao flavonoid toàn phan từ lá bạch quả. Dinh tính cao FLI bang sắc ky lớp mỏng.

Thiết lập sắc ký đồ van tay cao FLIL.-- - se sec secsxsececee XXXVII 3. _ Chiết xuất các flavonoid từ cao FL/]L. Xác định cấu trúc các chất phân lap. ccc cceccscessssscrssseseecseneeeeees LXIH 3.

Tham định quy trình định lượng quercetin, kaempferol và isorhamnetin bằng phương pháp HPLC. Khảo sát tính tuyến tính. -- cty ngu LXXII 3. Giới han phát hiện (LOD) giới hạn định lượng (LOQ).

_ Khảo sát tính tương thích hệ thống.-- ¿+ xxx sec csa LXXVII 3. Khao sat tính chọn ÏỌC. ----- c {c1 SE S1 cv ca LXXXI 3. Khảo sát độ lặp lại.

----c Q11 HH HH H1 nh nen LXXXIV 3. Ứng dụng quy trình đã xây dựng để định tính và định lượng quercetin, kaempferol và isorhamnetin trong các chê phâm.--- - «<< << << +52 LXXXVH CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ,. 5-5: c2c++rzrsrrertsrrrrrrrree XC IP. XCI PHU LUC 0.

XCV Nghiên cứu phân lập và xây dung phương pháp đánh giả các flavonoid trong cao bạch qua DANH MUC CAC CHU VIET TAT ACN Acetonitrile Doublet (mũi đôi) dd Doublet of doublet (mỗi đôi đôn) DDVN Dược điển Việt Nam DSC Differential scanning calorimetry (Phân tích nhiệt vi sai) EtOAc Ethyl acetate HPLC High perfomance liquid chromatography (Sac ky long hiéu nang cao) IR Infrared spectroscopy Hang s6 ghép kl Khối lượng LOD Limit of detection (Gidi hạn phát hiện) LOQ Limit of quantitation (Giới han định lượng) Khối lượng phân tử MeOH Methanol MS Mass spectrometry (Khối pho) NMR Nuclear magnetic resonance (Cong huong tu hat nhan) RSD Độ lệch chuẩn Singlet (mũi don) S/N Signal/Noise sp San pham -vị- Nghiên cứu phân lập và xây dung phương pháp đánh giả các flavonoid trong cao bạch qua SX San xuat TLC Thin layer chromatography (sắc ky bản mỏng) t Triplet (mũi ba) tí Thể tích UV Ultraviolet- visible -Vil- Nghiên cứu phân lập và xây dung phương pháp đánh giả các flavonoid trong cao bạch qua DANH MỤC CAC BANG Bảng 1. Kết quả ngiên cứu của nhóm tác giả Jing Zhang.-- 525cc secsrsrsered XI Bang 1. Chương trình pha động rửa giải xác định pho vân tay dịch chiết cao bạch qua trong nghiên cứu của tác giả A.--- c1 1 1111111111155 11115111155 xx2 XI Bang 1. Chương trình pha động rửa giải xác định pho vân tay dich chiết cao bạch qua trong nghiên cứu của tác giả Amifablh.

----- << c3 1111110 1131111111 111113 1111111552 xx4 XII Bang 1. Chương trình pha động rửa giải xác định pho vân tay dich chiết cao bach qua trong nghiên cứu cua tác giả Jiun-Lung LUO. eeecccccccccecceeeecececceceseeeeseecceeeeeeaenees XIV Bang 1. Khối lượng phân tử của các hợp chất có trong dich chiết bach quả (trước khi thủy phân)).

-- - -- + + + cc 1000111010113 1111111111110 5 11 11k 00 n1 0 1 kh XV Bảng 1. Khối lượng phân tử của các hợp chất có trong dịch chiết bach qua (sau khi thủy phân). + + + Ă 1101111110101 0 111111111011 11111111110 1 1 1 1111k 0 kh XVI Bang 1. Kết quả phân tích định lượng viên nén bach quả của tác gia Qi Ping Li.

Các chế phẩm có chứa thành phan cao bạch quả trên thị trường. Kết quả khảo sát hệ dung môi phân tích cao FL1. Kết quả khảo sát cao FLI theo thành phan pha tĩnh. Kết quả khảo sát cao FL1 theo thành phan pha động.

Kết quả khảo sát cao FL1 theo nồng độ acid phosphorie. Kết quả khảo sát cao FLI theo tỷ lệ pha động. - - s+s£sx+xzxz XLVI Bảng 3. Kết quả khảo sát cao FLI tốc độ dòng pha động.

- - - 56s xxx £esa L Bảng 3. Kết quả khảo sát cao FLI theo nhiệt độ buồng cột.-- 2 2 +6 se 52 LH Bảng 3. Kết quả phân lập flavonnoid. - - «sex 3xx SE vn E1 cv ru LVI Bảng 3.

Kết quả đánh giá độ tinh khiết của hop chất I và K bằng phương pháp HPLC ¬—. CeCe eee ena GG;;;E EE Eee enneaaE EE Oa: LXII Bang 3. Kết quả đánh giá độ tinh khiết của hop chất K và I bang phương pháp DSC eee .Ầa LXIH Bảng 3. Sự phân mảnh của hợp chất Ì.

-- --c-¿ 6s SE ESE£k£xEsEk ke rke LXV Bảng 3. Sự phân mảnh của hợp chất KK.---- -- 6-6 SE sE SE EEeEEvEeEeEeerseeees LXXI -VIII- Nghiên cứu phân lập và xây dung phương pháp đánh giả các flavonoid trong cao bạch qua Bảng 3. Tương quan nông độ và diện tích đỉnh của quercetin. Tương quan nông độ và diện tích đỉnh của kaempferol.

Tương quan nông độ và diện tích đỉnh của isorhamnetin. Kết quả khảo sát LOD và LOQ của quercetin, kaemferol và isorhamnetin ẮẲŸiẢÔ. SEES EEE LXXVII Bảng 3.