I. Giới thiệu về Luận Văn Thạc Sĩ
Luận văn thạc sĩ với tiêu đề 'Xây dựng bộ thuốc thử Pyrosequencing để xác định đột biến gen EGFR' được thực hiện bởi Huỳnh Viết Lộc tại Trường Đại học Bách Khoa, Đại học Quốc Gia TP.HCM. Nghiên cứu này tập trung vào việc phát triển một bộ thuốc thử sử dụng kỹ thuật Pyrosequencing để phát hiện các đột biến gen EGFR trong ung thư phổi không tế bào nhỏ. Mục tiêu chính là tạo ra một công cụ chẩn đoán có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, phù hợp với điều kiện y tế tại Việt Nam.
1.1. Bối cảnh nghiên cứu
Ung thư phổi là một trong những loại ung thư phổ biến và nguy hiểm nhất, với tỷ lệ tử vong cao. Đột biến gen EGFR đóng vai trò quan trọng trong việc xác định phương pháp điều trị đích bằng thuốc phân tử nhỏ. Tuy nhiên, các phương pháp hiện tại như giải trình tự trực tiếp có độ nhạy thấp. Pyrosequencing được chọn vì ưu điểm về độ nhạy, tốc độ và tính tự động hóa.
1.2. Mục tiêu nghiên cứu
Nghiên cứu nhằm xây dựng bộ thuốc thử Pyrosequencing để phát hiện các đột biến trên gen EGFR, bao gồm các vị trí 719, deletions, 768, 790, 858 và 861. Bộ thuốc thử này sẽ được áp dụng trên 100 mẫu bệnh phẩm từ bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ.
II. Phương pháp nghiên cứu
Nghiên cứu sử dụng kỹ thuật Pyrosequencing để phân tích các mẫu FFPE (Formalin-Fixed Paraffin-Embedded) từ bệnh nhân ung thư phổi. Các mẫu được xác định là ung thư phổi không tế bào nhỏ thông qua phân tích hình thái tế bào. Quy trình bao gồm thiết kế mồi, khuếch đại PCR, và thực hiện Pyrosequencing trên máy PyroMark Q24.
2.1. Thiết kế mồi và khuếch đại PCR
Các mồi đặc hiệu được thiết kế để khuếch đại các exon 18, 19, 20 và 21 của gen EGFR. Mồi giải trình tự được thiết kế cho các vị trí đột biến cụ thể. Quá trình khuếch đại PCR được thực hiện để tạo ra sản phẩm DNA phù hợp cho Pyrosequencing.
2.2. Thực hiện Pyrosequencing
Pyrosequencing được thực hiện trên máy PyroMark Q24 để xác định các đột biến gen EGFR. Kết quả được so sánh với bộ thuốc thử thương mại EGFR Pyro® kit (Q24) để đánh giá độ chính xác và độ tin cậy.
III. Kết quả nghiên cứu
Kết quả nghiên cứu cho thấy tỷ lệ đột biến gen EGFR là 67% trong 100 mẫu bệnh phẩm. Trong đó, đột biến deletions chiếm tỷ lệ cao nhất (76%), tiếp theo là đột biến L858R (25%). Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng tỷ lệ đột biến cao hơn ở nữ giới (84%) so với nam giới (57%). Độ tuổi càng cao, tỷ lệ đột biến càng tăng.
3.1. Phân tích đột biến gen EGFR
Các đột biến được phát hiện chủ yếu là deletions và L858R, hai đột biến có liên quan đến hiệu quả điều trị bằng thuốc ức chế EGFR-TKI. Kết quả này phù hợp với các nghiên cứu trước đây về đột biến gen EGFR trong ung thư phổi không tế bào nhỏ.
3.2. So sánh với bộ thuốc thử thương mại
Bộ thuốc thử Pyrosequencing được xây dựng trong nghiên cứu cho kết quả tương đồng với bộ thuốc thử thương mại EGFR Pyro® kit (Q24), chứng tỏ độ tin cậy và khả năng ứng dụng trong thực tiễn.
IV. Ý nghĩa và ứng dụng
Nghiên cứu này có ý nghĩa quan trọng trong việc cung cấp một công cụ chẩn đoán đột biến gen EGFR hiệu quả và chi phí thấp. Bộ thuốc thử Pyrosequencing có thể được sử dụng rộng rãi trong các bệnh viện tại Việt Nam, giúp cải thiện hiệu quả điều trị ung thư phổi không tế bào nhỏ.
4.1. Ý nghĩa khoa học
Nghiên cứu đóng góp vào việc hiểu biết về các đột biến gen EGFR tại Việt Nam, đồng thời cung cấp dữ liệu quan trọng cho các nghiên cứu tiếp theo trong lĩnh vực phân tích di truyền và công nghệ sinh học.
4.2. Ứng dụng thực tiễn
Bộ thuốc thử có thể được sử dụng trong chẩn đoán lâm sàng, giúp bác sĩ đưa ra quyết định điều trị phù hợp dựa trên kiểu gen của bệnh nhân. Điều này góp phần nâng cao chất lượng điều trị và giảm chi phí y tế.
