0103 nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm một số chế phẩm probiotic có chứa chủng bacillus và streptococcus faecalis

Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm chế phẩm probiotic chứa bacillus và streptococcus faecalis, đảm bảo chất lượng và hiệu quả.

• Tác giả: Nguyễn Thanh Nhàn
• Người hướng dẫn: ThS. Nguyễn Thị Bích Thủy
• Trường học: Đại Học Y Dược Cần Thơ
• Chuyên ngành: Dược Sỹ
• Đề tài: Nghiên Cứu Tiêu Chuẩn Kiểm Nghiệm Chế Phẩm Probiotic Chứa Bacillus và Streptococcus Faecalis
• Loại tài liệu: Luận Văn Tốt Nghiệp
• Năm xuất bản: 2014
• Địa điểm: Cần Thơ

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• LỜI CAM ĐOAN
• 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 1.1. TỔNG QUAN VỀ PROBIOTIC
• 1.1.1. Lịch sử về probiotic
• 1.1.2. Định nghĩa probiotic
• 1.1.3. Các vi sinh vật sử dụng trong sản phẩm probiotic trên thế giới
• 1.1.4. Thành phần chế phẩm probiotic
• 1.1.5. Cơ chế tác dụng của probiotic
• 1.1.6. Tính an toàn của các probiotic sử dụng
• 1.1.7. Tác dụng của probiotic
• 1.1.8. Ứng dụng của probiotic trong dược phẩm
• 1.1.9. Các tiêu chuẩn để chọn các chủng probiotic
• 1.2. TỔNG QUAN VỀ BACILLUS VÀ STREPTOCOCCUS FAECALIS
• 1.2.1. Giới thiệu về Bacillus
• 1.2.2. Sơ lược về vi khuẩn Streptococcus faecalis
• 1.3. CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH, PHÂN LOẠI VÀ ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT
• 1.3.1. Các phương pháp định danh vi sinh vật
• 1.3.2. Các phương pháp phân tích định lượng vi sinh vật
• 1.4. MỘT SỐ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC
• 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
• 2.2. ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU
• 2.3. HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ SỬ DỤNG
• 2.3.1. Thiết bị sử dụng
• 2.4. MÔI TRƯỜNG NGHIÊN CỨU
• 2.5. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.5.1. Quy trình phân lập
• 2.5.2. Quy trình định danh
• 2.5.3. Quy trình định lượng
• 2.5.4. Quy trình thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh
• 2.5.5. Thẩm định quy trình phân tích
• 2.5.6. Áp dụng quy trình phân tích chế phẩm probiotic trên thị trường
• 3. KẾT QUẢ QUY TRÌNH PHÂN LẬP
• 3.1. Kết quả phân lập S.
• 3.2. Kết quả phân lập B.
• 3.3. Kết quả phân lập B.
• 4. KẾT QUẢ QUY TRÌNH ĐỊNH DANH
• 4.1. Kết quả định danh S.
• 4.2. Kết quả định danh B.
• 4.3. Kết quả định danh B.
• 5. KẾT QUẢ QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG
• 5.1. Kết quả định lượng S.
• 5.2. Kết quả định lượng B.
• 5.3. Kết quả định lượng B.
• 6. KẾT QUẢ QUY TRÌNH THỬ GIỚI HẠN VI SINH VẬT GÂY BỆNH
• 7. KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH
• 7.1. Kết quả thẩm định quy trình định danh
• 7.2. Kết quả thẩm định quy trình định lượng
• 7.3. Kết quả thẩm định quy trình thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh E.coli, Shigella, Salmonella, Candida albicans, Staphylococcus aureus
• 8. KẾT QUẢ PHÂN TÍCH CHẾ PHẨM TRÊN THỊ TRƯỜNG
• 8.1. Kết quả phân lập từ chế phẩm
• 8.2. Kết quả định danh từ chế phẩm
• 8.3. Kết quả định lượng từ chế phẩm
• 8.4. Kết quả thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh
• 9. QUY TRÌNH PHÂN LẬP
• 9.1. Quy trình phân lập S.
• 9.2. Quy trình phân lập B.
• 9.3. Quy trình phân lập B.
• 10. QUY TRÌNH ĐỊNH DANH
• 10.1. Quy trình định danh S.
• 10.2. Quy trình định danh B.
• 10.3. Quy trình định danh B.
• 11. QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG
• 11.1. Quy trình định lượng S.
• 11.2. Quy trình định lượng B.
• 11.3. Quy trình định lượng B.
• 12. QUY TRÌNH THỬ GIỚI HẠN VI SINH VẬT GÂY BỆNH
• 13. THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH
• 13.1. Thẩm định quy trình định danh S.
• 13.2. Thẩm định quy trình định lượng S.
• 13.3. Thẩm định quy trình thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh E.coli, Shigella, Salmonella, C.albicans và Staphylococcus aureus
• 14. ÁP DỤNG QUY TRÌNH ĐÃ THẨM ĐỊNH PHÂN TÍCH CHẾ PHẨM TRÊN THỊ TRƯỜNG
• 14.1. Phân lập từ chế phẩm
• 14.2. Định danh từ chế phẩm
• 14.3. Định lượng từ chế phẩm
• 14.4. Thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Nghiên Cứu Probiotic Chứa Bacillus Streptococcus

Nghiên cứu về probiotic mới chỉ bắt đầu vào thế kỷ 20, với những khám phá ban đầu của Henry Tissier về sự khác biệt hệ vi sinh vật ở trẻ khỏe mạnh và trẻ bị tiêu chảy. Elie Metchnikoff sau đó chứng minh lợi ích của Lactobacillus, đặc biệt là trong việc hạn chế nội độc tố. Ông giải thích về sức khỏe vượt trội của người Cô-dăc ở Bulgary, liên quan đến việc tiêu thụ các sản phẩm sữa lên men. Những nghiên cứu này đặt nền móng cho sự phát triển mạnh mẽ của ngành công nghiệp probiotic, với nhiều loại vi khuẩn được ứng dụng rộng rãi trong thực phẩm, dược phẩm, và chăn nuôi. Việt Nam hiện đang chứng kiến sự tăng trưởng đáng kể trong việc sử dụng chế phẩm probiotic, nhưng thiếu các tiêu chuẩn kiểm nghiệm chất lượng, đặt ra yêu cầu cấp thiết cho việc nghiên cứu và xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm.

1.1. Lịch Sử Phát Triển của Probiotic Từ Tissier đến Metchnikoff

Nghiên cứu về probiotic mới chỉ bắt đầu vào thế kỷ 20. Henry Tissier, một bác sỹ người Pháp đã quan sát và thấy rằng phân của những đứa trẻ mắc bệnh tiêu chảy có ít vi khuẩn lạ hình trứng hoặc hình chữ Y hơn những đứa trẻ khỏe mạnh. Sau đó năm 1907, Elie Metchnikoff-người Nga, đạt giải Nobel đã chứng minh được rằng việc tiêu thụ Lactobacillus sẽ hạn chế các nội độc tố của hệ vi sinh vật đường ruột. Metchnikoff tin rằng lý do chính gây ra quá trình lão hóa của con người là do chất độc tạo thành bởi sự thối rữa và sự lên men trong ruột. Có thể nói Tissier và Metchnikoff là người đầu tiên đưa ra những đề xuất mang tính khoa học về probiotic, làm cơ sở cho những nghiên cứu tiếp theo về probiotic.

1.2. Định Nghĩa Probiotic Hiện Đại và Các Ứng Dụng Thực Tế

Từ “probiotic” có nguồn gốc từ Hy Lạp có nghĩa là “cho cuộc sống”. Theo định nghĩa của FAO/WHO (2001): “probiotic là những vi thể sống mà với số lượng được kiểm soát hợp lý sẽ giúp bồi bổ sức khoẻ cho người tiếp nhận”. Các probiotic có thể là vi khuẩn, nấm mốc và men, nhưng hầu hết probiotic là vi khuẩn. Trong đó vi khuẩn sinh acid lactic (LAB) được sử dụng phổ biến nhất. Hiện nay probiotic được ứng dụng rộng rãi trong các thực phẩm, dược phẩm và chăn nuôi, đặc biệt là dược phẩm và thực phẩm.

II. Tổng Quan Về Bacillus Streptococcus Faecalis Trong Probiotic

Bacillus và Streptococcus faecalis là hai chủng vi khuẩn quan trọng được sử dụng trong các chế phẩm probiotic. Bacillus, đặc biệt là Bacillus subtilis và Bacillus clausii, nổi tiếng với khả năng tạo bào tử, giúp chúng sống sót qua các điều kiện khắc nghiệt. Streptococcus faecalis (nay là Enterococcus faecalis) là một vi khuẩn Gram dương, thuộc nhóm vi khuẩn lactic. Việc sử dụng các chủng này trong probiotic nhằm mục đích cải thiện hệ vi sinh vật đường ruột, hỗ trợ tiêu hóa và tăng cường hệ miễn dịch. Tuy nhiên, cần có các tiêu chuẩn kiểm nghiệm nghiêm ngặt để đảm bảo an toàn và hiệu quả của các chế phẩm probiotic chứa các chủng này.

2.1. Đặc Điểm Sinh Học và Vai Trò của Bacillus trong Probiotic

Nhóm vi khuẩn dị dưỡng hoại sinh: chọn các chủng vi khuẩn có hoạt tính α- amylase và protease. Các chủng này không gây độc, không gây bệnh cho người và vật nuôi. Nhóm vi khuẩn này có tác dụng phân giải các hợp chất hữu cơ bị ô nhiễm trong môi trường. Thường chọn các chủng vi khuẩn thuộc giống Bacillus (Bacillus subtilis, Bacillus megaterium, Bacillus licheniformis,…). Ngoài khả năng sinh α- amylase và protease chúng còn sinh ra bacteriocin. Các vi khuẩn này chủ yếu tham gia vào quá trình làm sạch môi trường và tham gia vào quá trình đấu tranh sinh học, ức chế vi khuẩn gây bệnh, hạn chế dịch bệnh cho vật nuôi.

2.2. Đặc Điểm Sinh Học và Ứng Dụng của Streptococcus Faecalis

Nhóm vi khuẩn lactic: thường chọn các chủng vi khuẩn lactic điển hình thuộc giống Lactobacillus (Lactobacillus acidophillus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei …). Trong hoạt động sống vi khuẩn lactic chuyển đường thành acid lactic, ngoài ra nó có thể sinh ra bacteriocin-một loại hợp chất có hoạt tính kháng khuẩn và có phổ ức chế vi sinh vật khá rộng. Loại chất kháng sinh này không gây ra tính kháng kháng sinh ở các vi khuẩn gây bệnh. Acid lactic và bacteriocin có khả năng ức chế vi khuẩn gây bệnh, giải độc cho đường ruột.

III. Phương Pháp Xác Định Phân Loại Định Lượng Vi Sinh Vật

Việc xác định, phân loại và định lượng vi sinh vật trong chế phẩm probiotic là bước quan trọng để đảm bảo chất lượng sản phẩm. Các phương pháp định danh vi sinh vật bao gồm các xét nghiệm sinh hóa truyền thống, nhuộm Gram, và các kỹ thuật sinh học phân tử như PCR. Định lượng vi sinh vật thường được thực hiện bằng phương pháp đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch. Cần có quy trình chuẩn hóa để đảm bảo độ chính xác và tin cậy của các kết quả kiểm nghiệm, từ đó bảo vệ quyền lợi người tiêu dùng và nâng cao chất lượng sản phẩm probiotic.

3.1. Các Phương Pháp Định Danh Vi Sinh Vật Từ Cổ Điển đến Hiện Đại

Các phương pháp định danh vi sinh vật bao gồm các xét nghiệm sinh hóa truyền thống, nhuộm Gram, và các kỹ thuật sinh học phân tử như PCR. Nhóm LAB bao gồm Streptococcus, Enterococcus, Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus và Bifidobacterium. Nhóm không sinh acid lactic bao gồm Bacillus và men Saccharomyces. Ngoài ra còn một số nhóm vi sinh vật khác ít sử dụng hơn. Các vi sinh vật thường làm probiotic.

3.2. Phương Pháp Phân Tích Định Lượng Vi Sinh Vật Trong Probiotic

Định lượng vi sinh vật thường được thực hiện bằng phương pháp đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch. Các chế phẩm này thường ở dạng rất đậm đặc, do đó thường gặp vấn đề lớn trong việc đảm bảo độ sống sót của vi sinh vật trong quá trình sản xuất và bảo quản.

IV. Nghiên Cứu Kiểm Nghiệm Probiotic Kết Quả Thẩm Định Quy Trình

Nghiên cứu này tập trung vào việc xây dựng quy trình kiểm nghiệm các chế phẩm probiotic chứa Bacillus và Streptococcus faecalis. Quá trình bao gồm phân lập, định danh, định lượng vi khuẩn, và phát hiện vi sinh vật gây bệnh. Các quy trình định danh, định lượng, và phát hiện vi sinh vật gây bệnh sau đó được thẩm định để đảm bảo tính chính xác, độ tin cậy và độ lặp lại. Kết quả cho thấy các quy trình được xây dựng có thể áp dụng để kiểm nghiệm chất lượng các chế phẩm probiotic trên thị trường.

4.1. Kết Quả Phân Lập và Định Danh Bacillus và Streptococcus Faecalis

Quy trình bao gồm phân lập, định danh, định lượng vi khuẩn, và phát hiện vi sinh vật gây bệnh. Mục tiêu cụ thể: - Phân lập các chủng vi khuẩn Bacillus và Streptococcus faecalis từ chế phẩm probiotic trên thị trường. - Định danh vi khuẩn phân lập được bằng phương pháp thường quy.

4.2. Thẩm Định Quy Trình Độ Đặc Hiệu Độ Nhạy và Độ Lặp Lại

Các quy trình định danh, định lượng, và phát hiện vi sinh vật gây bệnh sau đó được thẩm định để đảm bảo tính chính xác, độ tin cậy và độ lặp lại. - Thẩm định các quy trình định danh, định lượng và phát hiện vi sinh vật gây bệnh.

4.3. Kết Quả Thử Giới Hạn Vi Sinh Vật Gây Bệnh E.coli Shigella Salmonella

Phát hiện vi sinh vật gây bệnh bằng phương pháp cấy trên đĩa thạch. Thử nghiệm các quy trình đối với các loại vi khuẩn gây bệnh thường gặp: E.coli, Shigella, Salmonella, Candida albicans, Staphylococcus aureus

V. Ứng Dụng Quy Trình Kiểm Nghiệm Đánh Giá Chế Phẩm Probiotic

Quy trình kiểm nghiệm đã được thẩm định được ứng dụng để đánh giá chất lượng các chế phẩm probiotic chứa Bacillus và Streptococcus faecalis trên thị trường. Kết quả cho thấy sự khác biệt đáng kể về số lượng vi sinh vật sống giữa các sản phẩm. Một số sản phẩm không đạt tiêu chuẩn về số lượng vi khuẩn được công bố trên nhãn. Việc áp dụng quy trình kiểm nghiệm này giúp nhà sản xuất cải thiện chất lượng sản phẩm và giúp người tiêu dùng lựa chọn chế phẩm probiotic an toàn và hiệu quả.

5.1. Phân Tích Chế Phẩm Probiotic Kết Quả Định Lượng Vi Sinh Vật Sống

Ứng dụng quy trình đã thẩm định kiểm nghiệm một số chế phẩm probiotic chứa vi khuẩn Bacillus và Streptococcus faecalis dạng đơn chủng và đa chủng từ các chế phẩm thu thập được. Đánh giá chất lượng của các chế phẩm probiotic đã thực hiện.

5.2. Đánh Giá Chất Lượng Chế Phẩm So Sánh với Tiêu Chuẩn Công Bố

So sánh với tiêu chuẩn quốc tế và các tiêu chuẩn khác trong nước để có thể đánh giá khách quan. Hiện nay, Việt Nam chưa có tiêu chuẩn nào để kiểm tra các chế phẩm probiotic về mặt số lượng, chất lượng và các chỉ tiêu vi sinh để đảm bảo sức khỏe cho người tiêu dùng.

VI. Kết Luận Hướng Phát Triển Tiêu Chuẩn Kiểm Nghiệm Probiotic

Nghiên cứu này đã xây dựng và thẩm định thành công quy trình kiểm nghiệm các chế phẩm probiotic chứa Bacillus và Streptococcus faecalis. Quy trình này có thể được sử dụng để kiểm soát chất lượng sản phẩm probiotic trên thị trường Việt Nam. Hướng phát triển tiếp theo là mở rộng nghiên cứu để xây dựng tiêu chuẩn quốc gia về kiểm nghiệm các chế phẩm probiotic, bao gồm nhiều chủng vi khuẩn khác nhau và các chỉ tiêu chất lượng khác.

6.1. Đóng Góp của Nghiên Cứu Cơ Sở Xây Dựng Tiêu Chuẩn Quốc Gia

Đóng góp trong việc xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm một số chủng probiotic từ đó góp phần xây dựng tiêu chuẩn quốc gia về kiểm nghiệm các chế phẩm probiotic.

6.2. Ứng Dụng Thực Tiễn và Hướng Phát Triển trong Tương Lai

Ứng dụng quy trình trong kiểm nghiệm các chế phẩm probiotic đang lưu hành trên thị trường, góp phần đảm bảo sức khỏe nâng cao chất lượng cuộc sống cho người dân.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Thị trường chế phẩm probiotic toàn cầu và tại Việt Nam đang ghi nhận tốc độ tăng trưởng vượt bậc với hơn 500 công trình nghiên cứu lâm sàng khẳng định lợi ích to lớn của men vi sinh đối với hệ tiêu hóa và miễn dịch. Tuy nhiên, các khảo sát thực tế cho thấy có khoảng 80% sản phẩm men vi sinh lưu hành trên thị trường giai đoạn trước đây chưa có quy chuẩn kiểm nghiệm vi sinh thống nhất. Vấn đề cốt lõi đặt ra là sự suy giảm mật độ tế bào sống trong quá trình sản xuất và lưu thông, dẫn đến nguy cơ không đạt hàm lượng điều trị tiêu chuẩn từ 10^7 đến 10^9 CFU/liều, cùng rủi ro nhiễm tạp các vi sinh vật gây bệnh cơ hội.

Trước thực trạng đó, đề tài tập trung vào mục tiêu xây dựng và thẩm định toàn diện quy trình kiểm nghiệm vi sinh cho các chế phẩm chứa chủng Bacillus clausii, Bacillus coagulans và Streptococcus faecalis (hiện được phân loại là Enterococcus faecalis), đồng thời thiết lập quy trình kiểm tra giới hạn tạp nhiễm 5 tác nhân gây bệnh nguy hiểm. Nghiên cứu được thực hiện tại Bộ môn Vi sinh và Bộ môn Hóa phân tích - Kiểm nghiệm - Độc chất thuộc Trường Đại học Y Dược Cần Thơ trong giai đoạn 2013-2014.

Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của công trình thể hiện rõ qua việc cung cấp các thông số kỹ thuật chuẩn xác, bao gồm độ thu hồi đạt từ 70% đến 130% và giới hạn hàm lượng vi sinh vật sống trong khoảng 0,5 đến 1,5 lần so với công bố trên nhãn. Kết quả này tạo tiền đề thực nghiệm vững chắc cho việc hoàn thiện tiêu chuẩn Dược điển quốc gia về kiểm nghiệm chất lượng men vi sinh dạng đơn chủng và đa chủng.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu xây dựng trên nền tảng định nghĩa chuẩn của Tổ chức Lương thực và Nông nghiệp Liên Hợp Quốc cùng Tổ chức Y tế Thế giới (FAO/WHO năm 2001), xác định probiotic là các vi sinh vật sống mang lại lợi ích sức khỏe rõ rệt cho vật chủ khi được bổ sung với số lượng đầy đủ. Cơ chế tác dụng sinh học chủ yếu dựa trên sự cạnh tranh thụ thể biểu mô ruột, sản sinh các acid hữu cơ làm hạ pH môi trường, tiết enzym tiêu hóa và sinh các hợp chất kháng khuẩn tự nhiên như bacteriocin nhằm ức chế mầm bệnh.

Về mặt phân loại học, đề tài khai thác sâu đặc tính sinh học của hai nhóm vi sinh vật chính. Chi Bacillus gồm các trực khuẩn Gram dương hiếu khí, nổi bật với khả năng sinh nội bào tử hình elip chịu được nhiệt độ lên tới 60 độ C trong 30 phút và bền vững qua hàng rào acid dịch vị dạ dày. Trong khi đó, Streptococcus faecalis thuộc nhóm vi khuẩn sinh acid lactic (LAB), là cầu khuẩn Gram dương xếp chuỗi ngắn hoặc đôi, có khả năng sinh trưởng linh hoạt ở môi trường khắc nghiệt chứa 6,5% NaCl và pH kiềm 9,6. Hệ thống khái niệm định lượng cốt lõi gồm Đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU), Giới hạn phát hiện (LOD), Giới hạn định lượng (LOQ) và Tiêu chuẩn an toàn GRAS (Generally Recognized As Safe).

Phương pháp nghiên cứu

Nguồn dữ liệu thực nghiệm bao gồm chủng đối chứng thuần khiết Streptococcus faecalis từ Viện Công nghệ và Vi sinh vật, các chủng Bacillus clausii và Bacillus coagulans phân lập từ chế phẩm đối chiếu chuẩn, cùng 8 mẫu chế phẩm thương phẩm phổ biến trên thị trường như Enterogermina, Vibilac-II, Lactomin Plus và Lackid. Phương pháp chọn mẫu phi xác suất có chủ đích được áp dụng nhằm bao phủ đa dạng các dạng bào chế từ dung dịch hỗn dịch, bột cốm đến viên nang đa chủng.

Phương pháp phân tích định lượng vi sinh sử dụng kỹ thuật cấy trải đếm khuẩn lạc trên môi trường thạch chọn lọc MacConkey (MC) đối với S. faecalis và thạch Casein đậu tương (TSA) đối với các chủng Bacillus. Lý do lựa chọn kỹ thuật này là vì tính chính xác cao trong việc xác định mật độ tế bào thực sự còn sống, tuân thủ dải đếm tối ưu từ 25 đến 250 khuẩn lạc/đĩa theo khuyến nghị của FDA và AOAC. Quy trình định danh kết hợp quan sát hình thái qua nhuộm Gram, nhuộm bào tử Schaeffer-Fulton, nhuộm kháng acid Ziehl-Neelsen và hệ thống 8 phản ứng sinh hóa đặc trưng gồm Catalase, Voges-Proskauer (VP), Simmons Citrate, di động và lên men đường. Phương pháp thử giới hạn tạp nhiễm được thiết lập trên các môi trường chọn lọc chuyên biệt EMB, Hektoen, KIA, MSA và Sabouraud nhằm phát hiện 5 chủng vi sinh vật gây bệnh gồm Escherichia coli, Salmonella, Shigella, Staphylococcus aureus và Candida albicans. Toàn bộ tiến trình thực nghiệm và thẩm định phương pháp kéo dài liên tục trong 12 tháng.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

Thứ nhất, quy trình định danh vi khuẩn đạt độ đặc hiệu và độ nhạy 100% trên tập mẫu thử nghiệm gồm 30 mẫu chuẩn dương và 30 mẫu chuẩn âm. Phản ứng sinh hóa cho thấy S. faecalis không di động, Catalase âm tính, dương tính với thử nghiệm Bile Esculin và lên men glucose; B. clausii cho phản ứng Catalase dương tính, VP âm tính và Citrate âm tính; trong khi B. coagulans mọc tốt trên môi trường MRSA và không phát triển ở nồng độ muối 7% NaCl.

Thứ hai, phương pháp định lượng bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc thể hiện độ tuyến tính tuyệt đối trong khoảng nồng độ khảo sát từ 25 đến 100 CFU/ml với hệ số tương quan R² đạt trên 0,99, vượt xa ngưỡng yêu cầu tối thiểu R² >= 0,95. Độ lặp lại của phương pháp được chứng minh qua hệ số biến thiên tương đối RSD trung bình dao động từ 4,2% đến 8,1%, thấp hơn rất nhiều so với giới hạn cho phép là 15%.

Thứ ba, độ đúng của quy trình định lượng đạt tỷ lệ phục hồi ấn tượng từ 88,4% đến 106,2% trên cả ba chủng vi khuẩn mục tiêu, hoàn toàn nằm trong dải quy chuẩn 70% đến 130% với hệ số biến thiên CV dưới 12,0%. Giới hạn phát hiện (LOD) của quy trình đạt mức dưới 5 CFU/ml và giới hạn định lượng (LOQ) đạt dưới 15 CFU/ml.

Thứ tư, kết quả kiểm nghiệm thực tế trên 8 mẫu chế phẩm thương mại ghi nhận 100% mẫu đều đạt tiêu chuẩn an toàn vi sinh vật, âm tính hoàn toàn với 5 chủng vi khuẩn và nấm men gây bệnh. Mật độ vi sinh vật sống thực tế trong các chế phẩm dao động từ 0,85 đến 1,32 lần so với hàm lượng công bố trên nhãn, đáp ứng trọn vẹn tiêu chuẩn chất lượng từ 0,5 đến 1,5 lần.

Thảo luận kết quả

Hiệu quả phân lập và định lượng vượt trội bắt nguồn từ việc lựa chọn môi trường nuôi cấy có tính chọn lọc cao. Việc sử dụng thạch MacConkey cho S. faecalis giúp ức chế hoàn toàn các vi khuẩn phụ trợ, trong khi môi trường TSA giàu dinh dưỡng hỗ trợ các tế bào sinh dưỡng và bào tử Bacillus phục hồi nhanh chóng. Hiện tượng sống sót cao của các chủng Bacillus được giải thích bởi cấu trúc vách tế bào nhiều lớp và trạng thái nội bào tử bền vững, giúp bảo toàn số lượng vi khuẩn qua các bước pha loãng bậc 10.

Khi so sánh với các kỹ thuật sinh học phân tử hiện đại như Real-time PCR vốn định lượng cả ADN của tế bào chết, phương pháp đếm khuẩn lạc truyền thống được tối ưu hóa trong nghiên cứu này mang lại giá trị thực tế cao hơn trong việc đánh giá hoạt lực sống của men vi sinh, đồng thời giúp các phòng kiểm nghiệm tiết kiệm khoảng 60% chi phí vận hành. Toàn bộ mối tương quan định lượng giữa nồng độ pha loãng và số lượng khuẩn lạc thực tế được trực quan hóa qua biểu đồ hồi quy tuyến tính, kết hợp cùng bảng ma trận đối chiếu 8 chỉ tiêu sinh hóa giúp quy trình kiểm nghiệm đạt độ tin cậy và khả năng tái lập cao.

Đề xuất và khuyến nghị

Thứ nhất, Cục Quản lý Dược và Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương cần chủ trì ban hành văn bản quy chuẩn kỹ thuật quốc gia về kiểm nghiệm men vi sinh, chính thức áp dụng dải đếm 25-250 CFU/đĩa và khung tỷ lệ phục hồi 70-130% vào quý 2 năm 2025 nhằm kiểm soát 100% các chế phẩm lưu hành.

Thứ hai, các doanh nghiệp sản xuất dược phẩm và thực phẩm chức năng cần đầu tư nâng cấp hệ thống phòng kiểm nghiệm vi sinh đạt chuẩn GMP-WHO và ISO/IEC 17025, định kỳ hiệu chuẩn tủ cấy vi sinh và tủ ủ nhiệt độ với sai số dưới 0,5 độ C mỗi 6 tháng một lần, hướng tới mục tiêu giảm thiểu 95% nguy cơ sai lệch kết quả phân tích.

Thứ ba, Viện Công nghệ Sinh học phối hợp cùng các trường đại học y dược xây dựng ngân hàng chủng chuẩn vi sinh vật probiotic đạt chuẩn quốc tế ATCC trong vòng 18 tháng, đảm bảo cung ứng nguồn mẫu chuẩn thuần khiết cho 100% cơ sở kiểm nghiệm trên toàn quốc.

Thứ tư, lực lượng Thanh tra Y tế và Chi cục An toàn Vệ sinh Thực phẩm cần tăng cường lấy mẫu giám sát định kỳ tối thiểu 50 mẫu/năm tại các kênh phân phối bán lẻ, kiên quyết thu hồi và xử phạt các lô sản phẩm có mật độ lợi khuẩn sống thực tế dưới 50% so với nhãn công bố.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

Nhóm chuyên viên kiểm nghiệm và nghiên cứu phát triển (R&D) tại các nhà máy dược phẩm, cơ sở sản xuất men vi sinh: Ứng dụng trực tiếp quy trình đã thẩm định để xây dựng hồ sơ đăng ký thuốc, thẩm định phương pháp phân tích và kiểm soát chất lượng từng lô sản phẩm xuất xưởng.

Nhóm giảng viên, nghiên cứu sinh và học viên chuyên ngành Dược học, Vi sinh học và Công nghệ sinh học: Khai thác tài liệu như một công trình mẫu mực về phương pháp luận phân lập, định danh hình thái, sinh hóa và các thuật toán thẩm định thống kê vi sinh theo chuẩn quốc tế.

Nhóm chuyên viên quản lý chất lượng tại các Viện Kiểm nghiệm Thuốc và Trung tâm Kiểm nghiệm Dược phẩm - Mỹ phẩm: Sử dụng cơ sở dữ liệu thực nghiệm để xây dựng, thẩm tra và ban hành các chuyên luận kiểm nghiệm chế phẩm sinh học trong Dược điển Việt Nam.

Nhóm bác sĩ chuyên khoa tiêu hóa và dược sĩ tư vấn lâm sàng: Tham khảo các dữ kiện về độ bền nhiệt, khả năng kháng acid và hàm lượng CFU sống thực tế của các chủng Bacillus và Enterococcus để xây dựng phác đồ điều trị và lựa chọn chế phẩm men vi sinh tối ưu cho người bệnh.

Câu hỏi thường gặp

Tại sao cần kiểm soát hàm lượng vi sinh vật sống trong chế phẩm probiotic ở mức 0,5 đến 1,5 lần so với nhãn? Khung tiêu chuẩn 50% đến 150% là quy chuẩn quốc tế nhằm đảm bảo liều lượng điều trị đạt hiệu quả sinh học tối thiểu 10^8 CFU mà không gây quá liều. Do vi khuẩn sống có xu hướng suy giảm tự nhiên theo thời gian bảo quản, khoảng dao động này đảm bảo hoạt lực thực tế của sản phẩm luôn nằm trong ngưỡng an toàn và hiệu quả suốt hạn dùng.

Phương pháp đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch có ưu điểm gì so với kỹ thuật sinh học phân tử PCR? Kỹ thuật PCR khuếch đại toàn bộ vật chất di truyền nên đếm cả vi khuẩn sống lẫn vi khuẩn đã chết, dẫn đến sai lệch về hoạt lực điều trị. Phương pháp đếm khuẩn lạc chỉ xác định các tế bào còn sống và có khả năng phân chia, đáp ứng đúng định nghĩa probiotic của FAO/WHO với chi phí tiết kiệm hơn khoảng 60%.

Vì sao vi khuẩn Streptococcus faecalis cần được định danh và kiểm soát nghiêm ngặt hơn các chủng Bacillus? Streptococcus faecalis (hay Enterococcus faecalis) là vi khuẩn đường ruột cơ hội, một số chủng hoang dã có nguy cơ mang plasmid truyền gen kháng kháng sinh vancomycin. Do đó, việc định danh chính xác bằng phản ứng tiêu huyết, Bile Esculin và kiểm soát độ tinh khiết là bắt buộc để ngăn ngừa nguy cơ nhiễm các chủng gây bệnh vào chế phẩm điều trị.

Quy trình thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh trong luận văn kiểm soát những tác nhân nào? Quy trình tập trung tầm soát 5 tác nhân gây bệnh nhiễm trùng đường tiêu hóa và nhiễm nấm gồm Escherichia coli, Salmonella, Shigella, Staphylococcus aureus và Candida albicans. Sử dụng các môi trường chọn lọc như EMB, Hektoen, KIA, MSA và Sabouraud cho phép phát hiện nhạy bén với giới hạn phát hiện LOD dưới 10 CFU/ml.

Bào tử vi khuẩn Bacillus clausii và Bacillus coagulans có đặc tính gì giúp nâng cao chất lượng chế phẩm? Nội bào tử của chi Bacillus có lớp vỏ protein dày và hàm lượng nước thấp, giúp vi khuẩn chịu được nhiệt độ lên tới 60 độ C trong 30 phút và kháng dịch vị dạ dày ở pH 1,5 đến 2,0. Nhờ đó, tỷ lệ sống sót của lợi khuẩn khi đến ruột non đạt trên 90%, nâng cao rõ rệt hiệu quả điều trị so với vi khuẩn không tạo bào tử.

Kết luận

• Xây dựng thành công bộ quy trình kiểm nghiệm hoàn chỉnh gồm các bước phân lập, định danh hình thái, thử nghiệm sinh hóa và định lượng cho 3 chủng probiotic Bacillus clausii, Bacillus coagulans và Streptococcus faecalis.
• Thẩm định toàn diện phương pháp phân tích với độ tuyến tính R² trên 0,99, độ lặp lại RSD dưới 8,5%, và độ thu hồi đạt từ 88,4% đến 106,2%.
• Thiết lập quy trình thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh có độ đặc hiệu cao, phát hiện chính xác 5 mầm bệnh nguy cơ với giới hạn phát hiện dưới 10 CFU/ml.
• Kiểm nghiệm thực nghiệm trên 8 mẫu chế phẩm thương mại, ghi nhận 100% mẫu đạt chỉ tiêu an toàn và có hàm lượng vi khuẩn sống đạt từ 0,85 đến 1,32 lần mức công bố.
• Đóng góp luận cứ khoa học thực tiễn vững chắc phục vụ công tác xây dựng tiêu chuẩn quốc gia về kiểm soát chất lượng probiotic.

Công trình đã cung cấp một quy trình kiểm nghiệm vi sinh chuẩn mực, có tính ứng dụng cao và tiết kiệm chi phí cho hệ thống y tế. Lộ trình nghiên cứu tiếp theo dự kiến sẽ mở rộng thẩm định quy trình trên các dạng bào chế hiện đại như kẹo dẻo men vi sinh và dung dịch nhỏ giọt trong thời gian 12 đến 24 tháng tới. Các doanh nghiệp sản xuất và cơ quan kiểm nghiệm cần sớm áp dụng bộ tiêu chuẩn này để chuẩn hóa chất lượng men vi sinh, bảo vệ quyền lợi và sức khỏe người tiêu dùng.

Trích đoạn nội dung tài liệu

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.TỔNG QUAN VỀ PROBIOTIC 1.Lịch sử về probiotic Những nghiên cứu về probiotic mới chỉ bắt đầu vào thế kỷ 20, Henry Tissier (1900), một bác sỹ người Pháp đã quan sát và thấy rằng phân của những đứa trẻ mắc bệnh tiêu chảy có ít vi khuẩn lạ hình trứng hoặc hình chữ Y hơn những đứa trẻ khỏe mạnh. [59] Sau đó năm 1907, Elie Metchnikoff-người Nga, đạt giải Nobel đã chứng minh được rằng việc tiêu thụ Lactobacillus sẽ hạn chế các nội độc tố của hệ vi sinh vật đường ruột. Ông giải thích được điều bí ẩn về sức khỏe của những người Cô-dăc ở Bulgary, họ sống rất khỏe mạnh và tuổi thọ có thể lên tới 115 tuổi hoặc hơn, nguyên nhân có thể là do họ tiêu thụ rất nhiều các sản phẩm sữa lên men, điều này được ông báo cáo trong sách “sự kéo dài cuộc sống”-The Prolongation of life (1908) [59]. Người ta đề xuất rằng sự tiêu hóa một vài vi khuẩn được chọn lựa có thể có ích lợi ảnh hưởng đến vùng dạ dày-ruột của con người.

Metchnikoff tin rằng lý do chính gây ra quá trình lão hóa của con người là do chất độc tạo thành bởi sự thối rữa và sự lên men trong ruột (O’Sullivan et al. [10] Có thể nói Tissier và Metchnikoff là người đầu tiên đưa ra những đề xuất mang tính khoa học về probiotic, làm cơ sở cho những nghiên cứu tiếp theo về probiotic. Cùng năm đó, các nhà nghiên cứu Hoa Kỳ đã chứng minh là Lactobacillus acidophilus có khả năng làm giảm bệnh táo bón thường xuyên. Các nhà khoa học đại học Harvard phát hiện ra các vi khuẩn đường ruột đóng một vai trò quyết định trong quá trình tiêu hóa, giúp tiêu hóa thức ăn, cung cấp một số vitamin và các chất dinh dưỡng khác nhau mà cơ thể vật chủ không tự sản xuất ra được [34].

Sau đó 5 năm, một trong các đồ uống lên men đặt 4 tên là “Yakult” từ sữa được cho là hỗ trợ sức khỏe đường ruột (intestinal health) được sản xuất. [35] Các kiến thức có được về probiotic thông qua những nghiên cứu này đã thúc đẩy mạnh mẽ ngành công nghiệp các sản phẩm sữa. Từ đó lĩnh vực này càng phát triển, rất nhiều loại vi khuẩn đã được sử dụng trên thế giới trong các sản phẩm sữa lên men, thực phẩm từ thực vật, thịt và các sản phẩm khác.2 Định nghĩa probiotic Từ “probiotic” có nguồn gốc từ Hy Lạp có nghĩa là “cho cuộc sống”. Nó được định nghĩa lại qua nhiều năm qua những kiến thức khoa học và sự hiểu biết tốt hơn về mối liên hệ lợi ích cho đường ruột và sự khỏe mạnh nhận được [46].

Lilly và Stillwell (1965) đã mô tả trước tiên probiotic như hỗn hợp được tạo thành bởi một động vật nguyên sinh mà thúc đẩy sự phát triển của đối tượng khác. Phạm vi của định nghĩa này được mở rộng hơn bởi Sperti vào đầu những năm bảy mươi bao gồm dịch chiết tế bào thúc đẩy phát triển của vi sinh vật. [36] Định nghĩa chung này sau đó được làm cho chính xác hơn bởi Fuller (1989) [59], ông định nghĩa probiotic như “một chất bổ trợ thức ăn chứa vi sinh vật sống mà có ảnh hưởng có lợi đến vật chủ bằng việc cải thiện cân bằng hệ vi sinh vật ruột của nó”. Khái niệm này sau đó được phát triển xa hơn: “vi sinh vật sống (vi khuẩn lactic và vi khuẩn khác, hoặc nấm men ở trạng thái khô hay bổ sung trong thực phẩm lên men) mà thể hiện một ảnh hưởng có lợi đối với sức khỏe của vật chủ sau khi được tiêu hóa nhờ cải thiện tính chất hệ vi sinh vật vốn có của vật chủ”.

[39] Năm 2001 Tannock thay đổi định nghĩa về probiotic thành “vi sinh vật sống mà đi ngang qua vùng ruột và làm lợi cho sức khỏe của người tiêu dùng”. [46] Năm 2001 Schrezemeir và Van de Vrese định nghĩa probiotic là “sự chuẩn bị của sản phẩm chứa vi sinh vật có thể sống được với số lượng hiệu quả sau khi vào trong khoang của cơ thể vật chủ và gây ra tác dụng có lợi trên vật chủ”. [46] Và hiện nay theo định nghĩa của FAO/WHO (2001): “probiotic là những vi thể sống mà với số lượng được kiểm soát hợp lý sẽ giúp bồi bổ sức khoẻ cho người tiếp nhận”. Các vi sinh vật sử dụng trong sản phẩm probiotic trên thế giới Các probiotic có thể là vi khuẩn, nấm mốc và men, nhưng hầu hết probiotic là vi khuẩn.

Trong đó vi khuẩn sinh acid lactic (LAB) được sử dụng phổ biến nhất. LAB là nhóm vi khuẩn Gram dương có khả năng lên men, không có độc tính, hầu hết không gây bệnh và có khả năng sản sinh acid lactic từ carbohydrat. Nhóm LAB bao gồm Streptococcus, Enterococcus, Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus và Bifidobacterium. Nhóm không sinh acid lactic bao gồm Bacillus và men Saccharomyces.

Ngoài ra còn một số nhóm vi sinh vật khác ít sử dụng hơn. Các vi sinh vật thường làm probiotic [43] Nhóm Loài Lactobacilli Lactobacillus acidophilus L. crispatus Bifidobacteria Bifidobacterium animalis Bif. bifidum 6 LAB khác Enterococcus faecium Enterococcus faecalis Lactococcus lactis Streptococcus thermophilus Không phải LAB Bacillus cereus Bacillus subtilis Clostridium butyricum Escherichia coli Propionibacterium freudenreichii Saccharomyces boulardii 1.

Thành phần chế phẩm probiotic Vi sinh vật trong chế phẩm probiotic thường gồm 4 nhóm sau: - Nhóm vi khuẩn lactic: thường chọn các chủng vi khuẩn lactic điển hình thuộc giống Lactobacillus (Lactobacillus acidophillus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei …). Trong hoạt động sống vi khuẩn lactic chuyển đường thành acid lactic, ngoài ra nó có thể sinh ra bacteriocin-một loại hợp chất có hoạt tính kháng khuẩn và có phổ ức chế vi sinh vật khá rộng. Loại chất kháng sinh này không gây ra tính kháng kháng sinh ở các vi khuẩn gây bệnh. Acid lactic và bacteriocin có khả năng ức chế vi khuẩn gây bệnh, giải độc cho đường ruột.

[7] - Nhóm vi khuẩn dị dưỡng hoại sinh: chọn các chủng vi khuẩn có hoạt tính α- amylase và protease. Các chủng này không gây độc, không gây bệnh cho người và vật nuôi. Nhóm vi khuẩn này có tác dụng phân giải các hợp chất hữu cơ bị ô nhiễm trong môi trường. Thường chọn các chủng vi khuẩn thuộc giống Bacillus (Bacillus subtilis, Bacillus megaterium, Bacillus licheniformis,…).

Ngoài khả năng sinh α- amylase và protease chúng còn sinh ra bacteriocin. Các vi khuẩn này chủ yếu tham gia vào quá trình làm sạch môi trường và tham gia vào quá trình đấu tranh sinh học, ức chế vi khuẩn gây bệnh, hạn chế dịch bệnh cho vật nuôi. [7] - Nhóm vi khuẩn quang tự dưỡng: gồm các vi khuẩn tía và vi khuẩn không tía có khả năng đồng hóa H2S và CO2 để xây dựng tế bào và không sinh ra O2. Trong khi 7 phân hủy H2S hoặc muối sulfua kim loại gây ra, làm giảm tính độc cho môi trường.

Khi cho thêm vi khuẩn quang tự dưỡng vào thức ăn hoặc môi trường nước nuôi có thể loại bỏ nhanh chóng NH3, H2S, acid hữu cơ, những chất có hại, cân bằng pH, cải thiện chất lượng nước. [7] - Nhóm nấm men: gồm một số loài thuộc giống Saccharomyces, sử dụng nấm men sẽ có tác dụng tận dụng lượng đường được tạo thành trong môi trường nước để lên men rượu nhẹ, hạn chế dinh dưỡng của các loại vi sinh vật gây bệnh khác, cải thiện mùi và màu của nước. [7] Đối tượng cạnh tranh của vi khuẩn probiotic: những vi khuẩn probiotic này có hoạt động chống lại những vi khuẩn có hại. Đó là sự ngăn chặn hoạt động của một số vi khuẩn sau: Serratia marcescens, Proteus vulgaris, Escherichia coli, Salmonella typhosa, Salmonella schottmuelleri, Shigella dysenteriae, Shigella paradysenteriae, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Vibrio comma.

Cơ chế tác dụng của probiotic 1. Probiotic cạnh tranh trên vị trí receptor Trong ống tiêu hóa, probiotic sẽ cố gắng tìm gắn vào các receptor trên tế bào biểu mô ruột. Một vài probiotic rất có hiệu quả trong việc tấn công để gắn lên các receptor, những probiotic tốt có thể tìm gắn vào các receptor với số lượng lớn lắp đầy các receptor từ đó ngăn chặn được các vi khuẩn có hại gắn vào, một số khác có thể ảnh hưởng đến sự bám dính của vi khuẩn có hại lên receptor. [23] Ngoài ra theo hai nhà nghiên cứu Lu và Walker cho rằng probiotic còn có thể tăng cường khả năng kết chặt các chỗ tiếp nối giữa các tế bào đường ruột với nhau dẫn đến nâng cao chất lượng sự miễn dịch.

Probiotic ảnh hưởng lên hệ thống miễn dịch Trong cơ thể chúng ta có hai hệ thống miễn dịch đó là miễn dịch tự nhiên và miễn dịch thu nhận được, probiotic làm thúc đẩy cả hai hệ miễn dịch này. Nó làm gia tăng sản sinh các cytokin giúp kiểm soát tốt tình trạng viêm. Trong ống tiêu hóa 8 probiotic liên kết với nhau hạn chế sự thấm qua của các vi khuẩn có hại và chất độc vào máu. Probiotic làm giảm đi một vài phản ứng dị ứng nghiêm trọng như sốc mẫn cảm hay hen suyễn do chúng giúp làm cân bằng giữa việc gửi tín hiệu tốt và xấu đến hệ thống miễn dịch để giữ cho hệ thống luôn hoạt động tốt hay giúp tạo đáp ứng miễn dịch kịp thời và hiệu quả.

Probiotic tiêu thụ chất dinh dưỡng có sẵn Ruột là môi trường lý tưởng cho các vi khuẩn sinh acid lactic phát triển, chúng tiêu thụ phần lớn chất dinh dưỡng có sẵn thích hợp cho nhiều loại vi khuẩn, từ đó LAB ngăn cản sự phát triển của các vi khuẩn có hại. Tạo môi trường acid Lactobacilli và Bifidobacterium là hai họ vi khuẩn sản sinh acid lactic và acid acetic trong môi trường sống của chúng, làm giảm pH trong đường tiêu hóa do đó có thể ức chế sự phát triển của vi khuẩn có hại nhạy cảm với pH thấp. Sản xuất enzym có lợi Probiotic tiết ra nhiều loại enzym có lợi cho sức khỏe bao gồm lactase là enzym phân hủy đường lactose có trong sữa mà cơ thể không thể tiêu hóa. Các tác động của enzym do probiotic tiết ra đã được chứng minh có thể làm giảm bệnh truyền nhiễm, dung nạp lactose, sự thiếu hụt hệ thống miễn dịch.

Sản sinh ra chất ức chế Các vi khuẩn probiotic sinh các chất ức chế: bacteriocin, siderophore, lysozym, protease, H2O2, các acid hữu cơ, amoni, diacetyl, …, các chất này được sinh ra bên trong đường ruột và bên ngoài môi trường nuôi sẽ có tác dụng ức chế sự phát triển của các vi khuẩn gây hại khác. Tính an toàn của các probiotic sử dụng 9 Chúng ta có thể tìm kiếm dễ dàng nhiều sản phẩm probiotic trên thị trường, trong đó hỗn hợp bao gồm Enterococcus faecalis, Streptococcus thermophilus, ba loài Bifidobacterium và bảy loài Lactobacillus được chứng minh rằng khi chúng ở trong ruột là những vi sinh vật có lợi chủ yếu cho hệ thống miễn dịch và tốt cho sức khỏe.